目的:分子流行病学方法检测乙型肝炎病毒(HBV)病毒株X基因一种新的变异方式。利用酵母双杂交技术自健康人肝细胞cDNA文库中筛选HBV X蛋白结合蛋白基因,并以反向酵母双杂交方法验证候选结合蛋白。通过病毒蛋白-宿主蛋白作用探讨X蛋白在肝细胞内的可能存在的分子作用机制。方法:自HBV慢性感染患者血清中提取HBV DNA,扩增X基因序列,克隆入pMD19 T载体,选择阳性克隆进行DNA测序,与已知HBV基因相应序列比较该患者体内HBV基因变异位点以及变异形式。选择克隆X基因序列作为研究靶基因,定向克隆到pDEST32构建表达X基因诱饵质粒,命名为pDEST32—X,western blot法验证pDEST32—X的表达。酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,选择阳性克隆质粒DNA测序,进行生物信息学技术分析。根据正向酵母双杂交的结果,PCR法扩增TCP1基因构建成诱饵质粒,将X基因构建成猎物质粒,反向酵母双杂交法验证正向筛选候选结合蛋白。结果:自21例患者中共挑选74个克隆测序,测序结果提示54个克隆X基因下游大段缺失突变,长度达234nt,位于1601-1834nt处,另有1个克隆发生245nt缺失突变。成功克隆了HBV X基因,构建了pDEST32-X酵母表达质粒及pDEST22-肝细胞cDNA文库。酵母双杂交筛选获得18个阳性克隆,其中3个克隆测序成功,均为TCP1蛋白基因。反向双杂交进一步验证了TCP1与HBV X蛋白的相互作用。结论:观察到一种X蛋白变异方式,这种大段缺失突变导致X蛋白下游编码序列丢失。成功筛选并克隆出肝细胞中HBV X蛋白相互作用蛋白——TCP1蛋白基因,有利于进一步研究HBV X蛋白在肝癌发生发展中的作用机制。