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目的: 本研究从细胞水平上观察H2O2对肺血管内皮细胞的损伤作用和APE1表达的影响;了解APE1表达上调后对肺血管内皮细胞损伤细胞的影响，从反面论证APE1在氧化应激诱导肺血管内皮细胞损伤过程中的是否有调控作用。 方法: (1)体外分离培养鼠肺血管内皮细胞，在含10％胎牛血清的DMEM培养基中调整细胞浓度为1×105/ml后培养于96孔培养板，以不同浓度H2O2刺激培养细胞，不同时间点检测ROS的产生、细胞增殖情况以及APE1的表达; (2)然后构建携带APE1基因的慢病毒载体体外转染肺血管内皮细胞，上调APE1的表达，观察APE1表达上调后对H2O2介导肺血管内皮细胞ROS产生及细胞增殖反应的影响。 结果: 一、H2O2对肺血管内皮细胞增殖反应、ROS产生以及APE1表达的影响 (1) MTT法结果显示与对照组相比，H2O2浓度为50umol/L刺激内皮细胞24h，OD值为0.211±0.002，肺血管内皮细胞增殖反应无明显改变，P＞0.05，差异无显著意义，当H2O2浓度为100umol/L，200umol/L，OD值分别为0.158±0.002，0.099±0.001，肺血管内皮细胞增殖反应低下(P＜0.05)，且200umol/L的H2O2比100umol/L抑制细胞的增殖反应更明显(P＜0.05);而采用DCF平均荧光强度值表示细胞内ROS的生成，当H2O2浓度为50umol/L，荧光强度为68.07±1.40，与对照组比较无明显差异(P＞0.05)，当浓度为100umol/L，200umol/L，荧光强度分别为87.46±1.89，101.79±1.56，呈上升趋势(P＜0.05)，且200umol/L比100umol/L的H2O2引起细胞产生ROS增多更加明显(P＜0.05)。用100umol/L H2O2刺激肺血管内皮细胞24h、48h、96h，OD值分别为0.161±0.002，0.103±0.001，0.067±0.004，与对照组比较，细胞的增殖反应低下(P＜0.05)，而48h的细胞增殖反应比24h有下降(P＜0.05)，96h比48h细胞增殖反应低下，P＜0.05有统计学意义;与此同时，细胞内ROS的生成，测得的DCF荧光强度分别为82.33±0.72，93.93±0.30，102.93±0.95，呈上升趋势(P＜0.05)，而胞内生成的ROS在48h较24h增加(P＜0.05)，96h生成的ROS比48h增多，P＜0.05，有统计学意义，呈时效、量效关系。 (2)与对照组相比，随着浓度的增加及刺激时间的延长，Western blot检测APE1蛋白的表达受抑制(P＜0.05)，同样具有时效、量效关系。 二、APE1对H2O2介导肺血管内皮细胞损伤的调节作用 (1)与对照组及空载体组相比，Western blot检测结果提示，携带APE1基因的慢病毒载体体外转染肺血管内皮细胞，能够上调APE1的表达(P＜0.05); (2)与对照组相比较，H2O2组ROS（荧光强度为86.40±1.19）产生显著增加(P＜0.05)、增殖反应（OD值为0.153±0.001）下降(P＜0.05);与H2O2组比较，H2O2+LV-GFP组ROS生成（荧光强度为83.23±0.98）及增殖能力（OD值0.154±0.002）无显著改变，APE1过表达后，肺血管内皮细胞增殖反应（OD值为0.209±0.001）抑制情况显著改善(P＜0.05)，而ROS生成（荧光强度为66.79±1.32）显著降低(P＜0.05)。 结论: H2O2可诱导肺血管内皮细胞的氧化损伤，且具有时间及剂量的依赖性，且能抑制细胞APE1蛋白的表达;上调APE1表达能提高细胞的抗氧化能力，对H2O2引起肺血管内皮细胞氧化性损伤有保护性作用。