活化TLR2诱导单核细胞性白血病THP-1细胞的凋亡和分化

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目的白血病是造血干细胞恶性转化引起的疾病,其特点之一是细胞分化被阻滞在幼稚阶段,不能产生成熟的功能白细胞,从而导致贫血、出血、感染等一系列临床表现。因而,诱导白血病细胞分化和促进其凋亡成为白血病治疗的新方向。Toll样受体在机体抗微生物感染中发挥着重要作用,其功能为识别微生物的组成分子,诱导抗微生物非特异性的天然免疫应答及炎症反应。树突状细胞表面表达的Toll样受体识别微生物组成分子后,促使其分化成熟同时启动抗原特异性的获得性免疫应答。TLR2能识别多种微生物细胞的组成分子,如细菌脂蛋白、脂磷壁酸、脂多糖(LPS)。细菌脂蛋白通过活化TLR2能诱导THP-1的凋亡,本实验的目的是探讨TLR2的另一配体PGN(肽聚葡糖)诱导单核细胞性白血病THP-1凋亡与分化的可能性,为临床治疗白血病提供新的思路。方法(1)RT-PCR检测基因的表达。(2)流式细胞术检测蛋白质的表达。(3)ELISA检测蛋白质的分泌情况。(4)PI-Annexin V染色检测凋亡水平。(5)抗体中和实验检测细胞因子与THP-1凋亡的相关性。(6)Western Blotting检测细胞内信号传导分子的活化。(7)细胞粘附实验检测PGN对细胞粘附的影响。结果RT-PCR分析显示THP-1细胞表达除TLR3以外所有的TLRs,流式细胞术检测到THP-1细胞表面表达CD14、TLR2、TLR4蛋白,TLR2配体PGN能上调CD14、TLR2的表达。同时PGN能诱导THP-1细胞表达细胞因子IL-1α、IL-8、TNFα的上调,并能活化TLR2传导通路中的P38、ERK以及NF-κB,说明THP-1表达功能性的TLR2受体。PI-Annexin V染色显示PGN能诱导THP-1细胞的凋亡,并呈时间和剂量依赖性关系。PGN所诱导的凋亡与自分泌TNFα密切相关,因为PGN能显著上调WNFα的表达,而且TNFα中和抗体能抑制PGN所诱导的凋亡。分析PGN对THP-1表达凋亡抑制蛋白的影响,结果显示PGN所诱导的表达改变与TNFα所诱导的改变呈有相似性。此外,PGN还上调单核细胞分化标志CD14、CD11、CD11的表达,并诱导THP-1细胞的粘附,说明PGN能诱导THP-1的分化,同时PGN上调协同刺激分子CD40、CD80、CD86的表达,提示PGN将可能显著改变TLR2阳性肿瘤细胞的致瘤性。结论PGN通过活化TLR2诱导THP-1细胞的凋亡,其机制与自分泌TNFα有关,而且PGN能诱导THP-1细胞的分化并上调协同刺激分子的表达。
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