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肝癌是全球第五大致死性癌症疾病,其发病率和死亡率已有逐渐上升趋势。近年来的研究发现肝脏的慢性炎症与肝癌的发生、进展及预后有密切联系。病毒、细菌等致病性病原微生物一旦入侵机体,将迅速启动机体天然免疫应答并触发炎症性反应。天然免疫是抗病原体感染的第一道防御屏障,引发炎症和对感染的抵抗,其反应反复持续会造成慢性炎症甚至可能引发癌症。研究发现NLRs(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors)家族成员,如NOD1、NOD2、NLRP1、NLRP3、NLRP7及NLRP12等,通过调控多种信号通路参与肿瘤尤其是胃肠道肿瘤的发生发展。NLRC5(NLR family,CARD domain containing 5)是最新发现的NOD样受体(NOD like receptors,NLRs)家族成员之一,参与机体天然免疫应答和抗病原体感染,可能在短期内诱发急性炎症反应或抗炎反应,而长期作用引发免疫调控功能失衡,可能与癌症的发生发展有关。NLRC5可能在肝癌的发生发展过程中起着重要作用。研究表明Wnt/β-catenin信号通路激活其下游靶基因从而引发肝癌的发生发展,而NLRC5在多种组织和细胞中存在表达,调控多条信号通路转导途径,但研究的重点主要集中在NF-κB、MAPK和IFN等信号通路,有关NLRC5和Wnt/β-catenin信号通路之间的研究尚不清楚。因此,本研究首次观察NLRC5对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:1.采用免疫组化技术检测NLRC5在人肝组织中蛋白表达。Western blot实验检测正常肝细胞株L02和三种肝癌细胞株Hep G2、SMMC-7721和BEL-7402中NLRC5蛋白表达。2.采用LipofectaminTM 2000试剂介导瞬时转染p EGFP-C2-NLRC5重组质粒和NLRC5 si RNA入Hep G2、SMMC-7721和BEL-7402细胞中,观察NLRC5的m RNA和蛋白表达水平。q RT-PCR法和Western blot法验证NLRC5转染效率。3.采用MTT、流式细胞术、细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验对NLRC5进行功能分析,观察体外实验中NLRC5表达变化对肝癌细胞的生物学行为及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响。4.采用β-catenin抑制剂i CRT3处理NLRC5过表达后的BEL-7402肝癌细胞,观察其对肝癌细胞增殖迁移能力及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响。结果:1.肝癌组织和细胞中NLRC5蛋白表达明显高于癌旁组织和正常肝细胞。2.过表达NLRC5能显著增强Hep G2、SMMC-7721和BEL-7402肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力;Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin和下游关键靶蛋白C-myc、Cyclin D1和MMP-7蛋白表达水平明显增加。3.沉默NLRC5可明显抑制Hep G2、SMMC-7721和BEL-7402肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,并将细胞周期阻滞在G0/G1期;β-catenin、C-myc、cyclin D1和MMP-7蛋白表达水平显著降低。4.i CRT3处理过表达后的BEL-7402细胞,NLRC5过表达组将不再出现促细胞增殖迁移能力的现象,也取消了NLRC5蛋白表达与β-catenin、C-myc、Cyclin D1和MMP-7蛋白表达之间的正相关关系,这提示NLRC5可能通过靶向Wnt/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论:NLRC5通过靶向Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力发挥着重要地促进作用。