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A型塞内卡病毒（SenecavirusA,SVA）是近年来出现的引起猪特发性水疱性疾病的新病原体,属于小核糖核酸病毒科塞内卡病毒属。SVA主要感染猪,其特征性症状为口腔、蹄冠等全身多个组织器官出现水疱和溃烂,仔猪的死亡率高达30%-70%。自2015年中国广东首次爆发SVA疫情以来,目前已在我国山东、河南、黑龙江、湖北、四川、广东等多个省份相继出现SVA感染的病例。然而,国内外对其流行病学和发病机制的研究有限。鉴于此,本研究首先分离了 2株SVA并完成了其全基因组测序。基于新分离的2株毒株和收集的218条SVA毒株进行了基因分型、毒株进化以及群体规模的分析,这在一定程度上为研究SVA的流行病学特点提供重要的理论参考。进一步,通过猪体攻毒试验得出2株SVA分离株都能成功感染猪只并引起猪体温升高、跛行、鼻唇部和蹄部的水疱、溃疡等SVA的典型临床症状。最后,采用SVA复制子技术结合定点突变发现 L 蛋白的（H42A、Q79A）突变和（△5H、△20G、△34N、△42H、△56R）缺失都可明显抑制报告基因的表达,表明SVAL蛋白对病毒的转录翻译具有重要影响。本研究首次揭示SVAL蛋白具有调控病毒转录和翻译的功能。1.A型塞内卡病毒的分离鉴定及遗传进化分析2020年广西某猪场部分猪只精神萎靡、食欲不振、口唇及蹄部发生水疱、糜烂等临床症状,疑似为SVA感染。为了确定该病的病原体,采取病变部位的水疱皮和水疱液进行RT-PCR检测,2份均为SVA阳性。将SVA阳性的病料研磨、无菌处理后接种生长良好的ST-R细胞进行病毒分离并通过IFA和WB进行鉴定,对鉴定正确的SVA毒株进行全长基因组扩增、测序和拼接,拼接完成后的毒株分别命名为GX84/2020（GenBank:MW117126）和 GX94/2020（GenBank:MW117127）。病毒生长曲线和蚀斑试验显示两个分离株具有相似的生长特性。将GX84/2020和GX94/2020毒株与GenBank收录的218株全长SVA毒株进行基因分型和遗传进化特点分析。基因分型分析结果表明,SVA毒株主要分为两个基因型,Ⅰ型毒株来自1989-2006年,Ⅱ型毒株来自2007-2020年,GX84/2020和GX94/2020属于基因Ⅱ型。遗传进化分析表明,SVA具有随时间进化的特点,且SVA种群历史规模可分为三个阶段:1986-2010年,保持相对稳定;2010-2017年,明显上升态势;2017年以后,出现下降。GX84/2020和GX94/2020毒株属于第三阶段。2.A型塞内卡病毒分离株的致病性分析为了确定广西SVA分离株的致病性,将12头8-10周龄健康仔猪分为三组,即PBS对照组、GX84/2020和GX94/2020感染组,每组4只,进行猪体攻毒试验。结果表明,攻毒组8头猪临床病变程度呈现差异,但均表现出SVA的一种或多种典型症状。其中,GX84/2020组的2头猪表现出现相对严重的临床症状,包括体温升高、鼻唇部的水疱、蹄部水疱和溃疡、以及蹄壳破裂进而重度跛行等,而另外2只猪症状比较轻微,仅观察到发热和蹄部肿胀。相比之下,GX94/2020感染组的猪临床症状比较轻微,除了发热和食欲不振之外,1头猪吻突出现肿胀、水疱;1头猪蹄部趾间肿胀;另外2头猪蹄部溃疡结痂。除此之外,还监测了 0-14天猪鼻拭子排毒量与血清中和抗体水平的变化。鼻拭子排毒结果显示,在攻毒后的第3天,鼻拭子中检测到病毒脱落,第7天达到脱落水平的峰值。中和抗体结果显示,在感染后的第5天开始检测到中和抗体,第5天以后中和抗体滴度上升加快,第7天开始缓慢上升,直至第14天中和抗体仍然存在。值得注意的是,中和抗体滴度在第7天出现上升拐点,正好与鼻拭子病毒在体内消失的时间一致。3.A型塞内卡病毒L蛋白的功能分析L蛋白（先导蛋白）是SVA编码的第一个蛋白,由于其蛋白序列在小RNA病毒中高度变异,功能也极不保守,所以目前对于它在SVA病毒整个生命活动中所发挥的功能还不明确。本研究在SVA感染性克隆pC3-SVA-GD05的基础上,首先将L蛋白进行H5A、H42A、R56A、Q79A 氨基酸突变和△5H、△20G、△34N、△42H、△56R、△69Q氨基酸缺失,然后进行病毒拯救并测定病毒滴度。结果表明△42H、△56R、Q79A对病毒致死;H42A、△20G病毒滴度降低了 5个数量级,对病毒严重致弱;H5A、△5H、△34N、△69Q病毒滴度降低了 2个数量级;R56A病毒滴度降低1个数量级。为了进一步确定L蛋白的作用,本研究建立了 SVA病毒亚基因组复制子并将L蛋白突变和缺失,进而研究L蛋白对病毒复制和转录翻译的影响。研究结果表明,H42A和Q79A突变后SVA复制子细胞内复制产生的RNA 水平降低,说明L蛋白突变影响了病毒复制。L 蛋白（H42A、Q79A）突变和（△5H、△20G、△34N、△42H、△56R）缺失严重（降低300-700倍）抑制了报告基因的表达水平,表明SVAL蛋白对病毒转录翻译起调控作用。总的来说,L蛋白对SVA病毒的存活必不可少,它在病毒的复制、转录及翻译过程中发挥重要作用。