尘螨促进DCs TIM4的表达以及诱导Th2细胞分化的研究

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目的:体外研究尘螨(House dust mite,HDM)是否通过诱导小鼠骨髓来源成熟树突状细胞(mature Dendritic cells,mDCs)T细胞免疫球蛋白域和粘液素样域-4(TIM4)的表达,进而促进初始T细胞分化为Th2细胞。方法:1.分离、培养小鼠骨髓来源的mDCs,显微镜下观察其生长、变化,流式细胞仪测定细胞表面分子CD11C、CD80、MHC-II、CD86对细胞进行鉴定;2.培养的mDCs分为四组:空白对照组(0U/ml HDM)100U/ml HDM刺激组、200U/ml HDM刺激组、400U/ml HDM刺激组,DCs与不同浓度HDM共同培养48h,收集HDM刺激后的DCs,分别用流式细胞仪、Western Blotting检测各组中TIM4的表达;3.将空白对照组、400U/ml HDM刺激组的DCs与小鼠初始T淋巴细胞共同培养48h,ELISA法测定混合培养细胞上清液中细胞因子IL-4及IFN-γ的表达,说明HDM对Th2细胞分化的影响。结果:1.收集培养第10天的DCs,流式细胞仪测定CD11C、CD80、MHC-II、CD86分子表达率分别为(95.18±1.20)%、(85.07±2.05)%、(90.85±1.24)%、(70.78±1.57)%。提示所培养的细胞为mDCs;2.不同浓度HDM刺激DCs48h后,分别用流式细胞仪和Western Blotting测定TIM4的表达。流式细胞仪测定不同组TIM4+细胞百分比分别为:(5.01±3.02)%、(12.78±1.57)%、(24.17±2.45)%、(55.85±2.24)%,与空白对照组相比,HDM刺激组TIM4表达水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western Blotting结果同样说明两组间差异具有统计学意义(P<0.05);3.ELISA法检测经不同浓度HDM刺激后DCs与初始T细胞混合培养上清液中IL-4及IFN-γ的表达水平,空白对照组、4OOU/ml HDM组IL-4水平分别为(2.52±2.80)pg/ml、(43.10±5.20)pg/ml, IFN-y水平分别为(90.37±3.74)pg/ml、(38.74±3.67)pg/ml。结果显示经HDM作用后IL-4表达明显升高(P<0.05),而IFN-γ表达降低(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:小鼠骨髓来源的mDCs经HDM刺激后TIM4表达水平升高,且呈一定的剂量依赖性,TIM4+DCs可促使初始T细胞活化并分化为Th2细胞。
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