miR-21在宫颈鳞癌患者血清中的表达及对宫颈癌SiHa细胞生物学特性影响的研究

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目的:淋巴结转移被公认为是影响宫颈癌预后的主要危险因素之一,伴有淋巴结转移的宫颈癌患者的生存率远远低于无淋巴结转移者。而宫颈癌早期即可发生淋巴结转移,同一分期的病人有无淋巴结转移,预后迥异,且是否有淋巴结转移对于治疗及手术方式和术后放化疗的选择关系密切。研究发现,宫颈癌的发生与miRNA的改变密切相关。宫颈癌病理中大部分是鳞癌,本研究拟通过Real-time RT-PCR检测伴有淋巴结转移的宫颈鳞癌、无淋巴结转移的宫颈鳞癌以及正常宫颈血清中miR-21的表达,并探讨其表达情况与宫颈鳞癌淋巴结转移有无关系。方法:选择2011年1月—2011年9月在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科住院接受治疗的患者为研究对象,其中,宫颈鳞癌伴淋巴结转移者25例,不伴淋巴结转移者40例,正常对照组15例。治疗前留取患者血清,实时荧光定量PCR测定血清miR-21水平,运用Pearson相关分析血清miR-21水平与患者淋巴结转移的关系,绘制受试者工作曲线(ROC),计算血清miR-21的诊断界值。结果:1、宫颈癌伴淋巴结转移患者血.清miR-21水平较不伴淋巴结转移患者和正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2、血清miR-21水平与宫颈癌淋巴结转移呈正相关(r=0.408,P<0.001),血清miR-21在宫颈癌确诊病例中诊断淋巴结转移的ROC曲线下面积为0.770,最大约登指数0.485,相应灵敏度56%,特异度92.5%,对应诊断界值6.65。结论:血清miR-21在诊断宫颈癌淋巴结转移方面有临床价值和应用空间。目的:宫颈癌是女性常见的生殖道恶性肿瘤,主要病理类型有宫颈癌鳞癌和腺癌。高危型人乳头瘤病毒(human papilomavirus, HPV)在宫颈上皮细胞恶性转化中起重要作用,HPV16与宫颈鳞癌有关,HPV18与宫颈腺癌有关,但宫颈癌发生的具体分子机制尚不清楚。本研究利用RNA干扰技术改变来源于人宫颈鳞癌的SiHa细胞(HPV16阳性)中miR-21的表达水平,观察SiHa细胞增殖和迁移、侵袭的变化,探讨miR-21对SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭能力等生物学特性的影响,为宫颈鳞癌早期诊断及基因治疗、预后提供实验基础。方法:选取人宫颈鳞癌SiHa细胞系,运用人工合成miR-21的模拟物miR-21-mimic和miR-21的抑制物miR-21-Inhibitor,将宫颈癌SiHa细胞分为miR-21-mimic组、miR-21-Inhibitor组及空白转染组,利用脂质体Lipofectamin2000瞬时转染技术将miR-21-mimic和miR-21-Inhibitor转染SiHa细胞后,通过流式检测转染率,转染48小时后实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-21的相对表达量、MTT法检测转染后各组细胞增殖能力、Transwell小室检测各组细胞的迁移能力及侵袭能力。结果:1、实时荧光定量PCR结果显示:三组SiHa细胞均表达了miR-21,而转染了miR-21-mimic后SiHa细胞中的miR-21表达量较对照组增加,转染了miR-21-inhibitor后SiHa细胞中的miR-21表达量则降低;2、MTT增殖结果显示:在转染了miR-21-mimic48h后,SiHa细胞的增殖活性出现明显增强,相反的,转染了miR-21-inhibitor48h后,SiHa细胞增殖活性明显降低,说明了miR-21对宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖活性有一定的促进作用。3、Transwell小室测迁移能力试验结果显示:转染miR-21-mimic后明显促进SiHa细胞的迁移能力,转染miR-21-inhibitor后则抑制了SiHa细胞的迁移能力。4、Transwell小室侵袭能力结果显示:转染miR-21-mimic后明显促进SiHa细胞的侵袭能力,转染miR-21-inhibitor后则抑制了SiHa细胞的侵袭能力。结论:1、miR-21模拟物miR-21-mimic能够有效上调miR-21在SiHa细胞中的表达水平,而miR-21抑制剂miR-21-inhibitor能够有效下调miR-21在SiHa细胞中的表达水平。2、上调miR-21在SiHa细胞中的表达可以促进细胞的增殖活性,对细胞的迁移,侵袭能力有明显的增强作用;下调miR-21在SiHa细胞中的表达则抑制细胞的增殖,同时减弱细胞的迁移及侵袭能力。3、miR-21与宫颈癌的发生发展密切相关。
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