论文部分内容阅读
目的:牙周骨缺损或骨量不足是临床上牙周治疗中的重难点问题也是导致种植失败的主要原因,引导骨组织再生技术是目前实现牙周骨组织再生的主要手段。引导骨组织再生技术是利用膜材料作为屏障,放置在骨缺损表面,阻挡生长速度较快的纤维结缔组织占据骨缺损的空间,为骨组织再生、重建提供了生长空间。但目前商品化的胶原膜由于其加工工艺繁琐,很难在其中加载药物或生长因子,因而在临床应用中主要发挥屏障膜的作用,促进骨组织再生的能力不明显。本实验制作了一种含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜,该膜材料具有疏松的能够促进细胞粘附及稳定血凝块的胶原层,以及致密的能够阻挡周围纤维结缔组织入侵的壳聚糖层,并在胶原层中加载了载阿司匹林壳聚糖微球,通过缓释阿司匹林促进骨缺损区域的骨再生过程。方法:1.含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜的制备及性能评估:利用离子凝胶法制备载阿司匹林壳聚糖微球,透射电子显微镜下观察微球的形貌,体外缓释试验评估微球的体外释放效果;将壳聚糖溶液铺膜,然后将EDC-NHS交联后的胶原微球混合溶液铺于壳聚糖膜上,冷冻干燥后制成含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜。扫描电子显微镜下观察膜的壳聚糖层、胶原层以及横断面结构,对比纯壳聚糖膜、纯胶原膜、交联后的胶原膜以及本实验制作的含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜的降解情况,评估材料的机械性能。2.含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜的生物相容性及促成骨能力评估:将载药与未载药的膜材料与大鼠骨髓间充质干细胞共培养,通过CCK-8法检测不同浓度阿司匹林对大鼠骨髓间充质干细胞增殖情况的影响;ALP试剂盒检测不同浓度阿司匹林促成骨能力,AO/EB细胞染色评估细胞活性;构建SD大鼠颅骨缺损模型,将ALP结果中促成骨能力较好的在阿司匹林微球的胶原-壳聚糖膜组覆盖于SD大鼠颅骨缺损处,于第4w和8w进行Micro-CT扫描及组织病理切片观察。结果:1.利用离子凝胶法制备的载阿司匹林壳聚糖纳米微球透射电镜下呈表面光滑的球形,粒径较均一,分散较好,能缓释出制备过程中80%的阿司匹林且缓释时间达14d;扫描电镜结果显示该膜具有疏松的胶原层和致密的壳聚糖层两层结构,交联的方法可以改善胶原的机械性能,降低其降解速率。2.CCK-8法进行细胞增殖实验并进行统计学分析,在第1d、3d载药组与不含药组对细胞增殖的影响无统计学差异,第5d、7d 50mg组促进细胞增殖的能力优于其他组;ALP测试结果显示,含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜组与不载药组相比促成骨作用优势明显;动物实验结果表明,覆盖阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜组骨缺损处可见明显新骨,成骨速度较快,组织病理切片证实该膜材料具有引导骨组织再生的能力。结论:本研究所制备的含载阿司匹林壳聚糖微球的胶原-壳聚糖不对称引导骨再生膜具有疏松的胶原载药层以及致密的壳聚糖层,能够达到缓释阿司匹林的目的,该膜材料具有较好的生物相容性以及可降解性,具有引导骨组织再生的能力。