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目的:三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)是乳腺癌(Breast Cancer,BC)预后最差的分子亚型,目前没有标准治疗方案。亲环J(Cyclophilin J,CYPJ)具有肽基脯氨酰基顺反式异构酶(Ptidyl-Prolyl cis-trans Isomerases,PPlase)活性,在多种肿瘤中通过高表达促进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,并影响患者预后。鉴于PPlase抑制剂是研究热点,通过抑制其活性,可以抑制肿瘤生长。CYPJ在TNBC中的研究较少,本课题拟研究CYPJ在TNBC中的表达情况及对BC细胞增殖、侵袭和迁移的影响,以揭示CYPJ在TNBC发病机制中的作用。方法:1.免疫组织化学方法检测CYPJ在40例TNBC组织和40例非TNBC组织中CYPJ的表达情况,并分析CYPJ表达水平与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、有无绝经及淋巴结转移的关系。2.免疫印迹实验(Western blot)检测正常乳腺细胞株和BC细胞株中CYPJ表达情况,并比较不同细胞株间的差异。3.TNBC细胞株MDA-MB-231和非TNBC细胞株SK-BR-3分别转染空载体(p CMV-Myc)或CYPJ基因过表达载体(p CMV-CYPJ-Myc),构建空载体组和CYPJ过表达组的BC细胞株。转染48h后,提取细胞蛋白,Western blot验证转染效果。4.CCK8实验检测各组细胞的增殖能力。5.Transwell小室检测各组细胞的迁移能力。6.Transwell小室+基底胶(matrigel),检测各组细胞的侵袭能力。7.流式细胞术,DNA Prep Stain kit细胞周期试剂盒检测各组细胞的细胞周期。8.流式细胞术,Annexin V FITC/PI凋亡检测试剂盒检测各组细胞的细胞凋亡。结果:1.免疫组织化学检测结果显示,CYPJ在TNBC组织中的表达高于非TNBC组织,差异有统计学意义(χ2=13.653,P<0.01);CYPJ表达水平与患者年龄、组织学分级、有无绝经及淋巴结转移情况无关,而与肿瘤大小有关(χ2=4.266,P=0.039)。2.CYPJ蛋白在TNBC细胞株MDA-MB-231表达水平较非TNBC细胞株SK-BR-3细胞株表达高(0.451±0.041vs 0.221±0.035),且明显高于人乳腺正常细胞株MCF-10A(0.017±0.005)。3.Western blot结果显示,在MDA-MB-231细胞和SK-BR-3中,过表达组Myc标签蛋白和CYPJ蛋白高表达(1.038±0.061 vs 1.052±0.098,P>0.05;1.273±0.036 vs1.242±0.012,P>0.05);空载体组Myc标签蛋白阴性,CYPJ蛋白含量低。4.CCK8实验结果表明:在第3天、第4天,空载体组和CYPJ过表达组两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。5.细胞迁移实验结果表明:1)在MDA-MB-231中,CYPJ过表达组与空载体组相比,迁移细胞数增加,差异有统计学意义(373.333±18.175 vs246.000±20.518,P<0.05)。2)在SK-BR-3中,CYPJ过表达组与空载体组相比,迁移细胞数增加,差异有统计学意义(171.000±11.533 vs 99.667±13.317,P<0.05)。6.细胞侵袭实验结果表明:1)在MDA-MB-231中,CYPJ过表达组与空载体组相比,侵袭细胞数增加,差异有统计学意义(325.333±16.803 vs 212.000±20.518,P<0.05)。2)在SK-BR-3中,CYPJ过表达组与空载体组相比,侵袭细胞数增加,差异有统计学意义(100.333±10.017 vs 60.667±14.012,P<0.05)。7.细胞周期实验结果显示:1)在MDA-MB-231细胞中,CYPJ过表达组与空载体组相比,G0/G1期所占比例减少,差异有统计学意义(51.487±3.423 vs 69.027±3.501,P<0.01);S期所占比例增加,差异有统计学意义(34.903±3.611 vs 23.957±2.149,P<0.05);G2/M期所占比例增加,差异无统计学意义(13.943±1.231 vs 10.017±2.358,P>0.05)。2)在SK-BR-3细胞中,CYPJ过表达组与空载体组相比,G0/G1期所占比例减少,差异有统计学意义(43.257±3.142 vs 67.107±2.529,P<0.01);S期所占比例增加,差异无统计学意义(29.707±2.925 vs 21.001±2.391,P>0.05);G2/M期所占比例增加,差异有统计学意义(27.371±1.017 vs 11.893±1.392,P<0.05)。8.细胞凋亡实验结果显示:1)在MDA-MB-231细胞中,CYPJ过表达组与空载体组相比,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(13.753±3.051%vs 20.087±1.651%,P<0.05)。2)在SK-BR-3细胞中,CYPJ过表达组与空载体组相比,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(13.213±2.595%vs23.321±3.913%,P<0.05)。结论:CYPJ在TNBC组织中的表达高于非TNBC组织,其表达水平与肿瘤的大小相关,而与患者年龄、组织学分级、有无绝经及淋巴结转移情况无关。同样CYPJ在TNBC细胞株(MDA-MB-231)表达高于非TNBC细胞株(SK-BR-3)。CYPJ过表达可促进BC细胞增殖、侵袭和迁移,并抑制细胞凋亡,提示CYPJ在TNBC发病机制中可能发挥重要作用,并可能成为TNBC患者治疗的潜在靶点。