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目的:探讨丹皮姜黄方干预冠心病不稳定型心绞痛血瘀气滞证的临床疗效、主要作用通路及相关靶点,以期为丹皮姜黄方治疗该病证的临床使用提供理论及实验依据。
方法:1.临床疗效观察:收集冠心病不稳定型心绞痛血瘀气滞证患者60例,随机分为对照组和治疗组,对照组30例,给予西医常规治疗方案,治疗组30例,在西医治疗方案的基础上联合应用丹皮姜黄方,干预4周,分别于治疗前、后观察两组受试者在心绞痛积分、中医证候积分、心电图等方面的改善情况。2.网络药理学:基于网络药理学平台搜索中药数据库获取丹皮姜黄方中核心药物牡丹皮、姜黄的成分、靶点,利用网络拓扑分析筛选药物的关键成分,搜索疾病数据库获取不稳定型心绞痛靶点,利用FunRich3.1.3将两部分靶点映射,对映射结果利用DAVID数据库进行通路分析,获得牡丹皮、姜黄干预不稳定型心绞痛的通路及相关靶点。3.靶点临床水平验证:收集治疗组治疗前后、对照组治疗前后及健康志愿者的血清进行western blot及elisa实验,观察丹皮姜黄方对明星通路(TNF信号通路)中的相关靶点(TNF-α、IL-1β、COX2、IKBKB、CCL2)蛋白表达的影响。4.靶点细胞水平验证:培养人脐静脉内皮细胞,借助AngⅡ建立细胞炎症模型,以芍药苷、姜黄素进行干预,利用elisa实验观察芍药苷、姜黄素对细胞炎症因子(TNF-α、Il-1β、IL-6)表达的影响。
结果:1.临床疗效观察:丹皮姜黄方能协同提升西医治疗冠心病不稳定型心绞痛血瘀气滞证的临床疗效,改善治疗组患者的心绞痛积分、中医证候积分及心电图的有效率,效果优于对照组(P<0.05)。治疗期间治疗组患者未见不良反应。2.网络药理学:共获得牡丹皮成分8个:Gallicacid、Mairin、(+)-catechin、Quercetin、5-[[5-(4-methoxyphenyl)-2-furyl]methylene]barbituric acid、Kaempferol、Sitosterol、Paeonifolorin,相应靶点308个,姜黄成分11个:1,5-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,4-pen-tadien-3-one、ar-tumerone、Curcumine、Demethoxycurcumin、ethyl benzene、Germacron、Heptanol、n-undecane、Stigmasterol、Campesterol、CLR,相应靶点185个,网络拓扑分析提示芍药苷、姜黄素分别是牡丹皮、姜黄的有效活性成分。获得不稳定型心绞痛靶点141个,FunRich对药物和疾病靶点映射得到重复靶点42个,提取DAVID通路分析中排名靠前的通路有:TNF signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、NOD-like receptor signaling pathway、HIF-1signaling pathway。第一通路TNF信号通路中包含的靶点有:PTGS2、CCL2、MMP3、IL1B、IKBKB、NFKBIA、FOS、IL6、TNF,拟对该通路中的相关靶点进行后续实验验证。3.靶点临床水平验证:治疗前,治疗组和对照组患者血清中的炎症靶点TNF-α、IL-1β、COX2、IKBKB、CCL2的表达均高于正常组,经4周干预治疗后,上述炎症靶点在两组患者血清中的表达水平均呈下降趋势,且治疗组下降趋势优于对照组(P<0.05)。4.靶点细胞水平验证:AngⅡ刺激HUVECs的炎症反应,促进TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平升高,芍药苷及姜黄素干预后,均能有效控制上述细胞炎症因子的表达水平。
结论:丹皮姜黄方治疗不稳定型心绞痛血瘀气滞证临床疗效确切且无明显不良反应,控制炎症反应是丹皮姜黄方干预不稳定型心绞痛的重要机制,相关靶点包括TNF-α、IL-1β、COX2、IKBKB、CCL2、IL6等。本研究为丹皮姜黄方治疗不稳定型心绞痛的临床应用提供了理论和实验证据。
方法:1.临床疗效观察:收集冠心病不稳定型心绞痛血瘀气滞证患者60例,随机分为对照组和治疗组,对照组30例,给予西医常规治疗方案,治疗组30例,在西医治疗方案的基础上联合应用丹皮姜黄方,干预4周,分别于治疗前、后观察两组受试者在心绞痛积分、中医证候积分、心电图等方面的改善情况。2.网络药理学:基于网络药理学平台搜索中药数据库获取丹皮姜黄方中核心药物牡丹皮、姜黄的成分、靶点,利用网络拓扑分析筛选药物的关键成分,搜索疾病数据库获取不稳定型心绞痛靶点,利用FunRich3.1.3将两部分靶点映射,对映射结果利用DAVID数据库进行通路分析,获得牡丹皮、姜黄干预不稳定型心绞痛的通路及相关靶点。3.靶点临床水平验证:收集治疗组治疗前后、对照组治疗前后及健康志愿者的血清进行western blot及elisa实验,观察丹皮姜黄方对明星通路(TNF信号通路)中的相关靶点(TNF-α、IL-1β、COX2、IKBKB、CCL2)蛋白表达的影响。4.靶点细胞水平验证:培养人脐静脉内皮细胞,借助AngⅡ建立细胞炎症模型,以芍药苷、姜黄素进行干预,利用elisa实验观察芍药苷、姜黄素对细胞炎症因子(TNF-α、Il-1β、IL-6)表达的影响。
结果:1.临床疗效观察:丹皮姜黄方能协同提升西医治疗冠心病不稳定型心绞痛血瘀气滞证的临床疗效,改善治疗组患者的心绞痛积分、中医证候积分及心电图的有效率,效果优于对照组(P<0.05)。治疗期间治疗组患者未见不良反应。2.网络药理学:共获得牡丹皮成分8个:Gallicacid、Mairin、(+)-catechin、Quercetin、5-[[5-(4-methoxyphenyl)-2-furyl]methylene]barbituric acid、Kaempferol、Sitosterol、Paeonifolorin,相应靶点308个,姜黄成分11个:1,5-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,4-pen-tadien-3-one、ar-tumerone、Curcumine、Demethoxycurcumin、ethyl benzene、Germacron、Heptanol、n-undecane、Stigmasterol、Campesterol、CLR,相应靶点185个,网络拓扑分析提示芍药苷、姜黄素分别是牡丹皮、姜黄的有效活性成分。获得不稳定型心绞痛靶点141个,FunRich对药物和疾病靶点映射得到重复靶点42个,提取DAVID通路分析中排名靠前的通路有:TNF signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、NOD-like receptor signaling pathway、HIF-1signaling pathway。第一通路TNF信号通路中包含的靶点有:PTGS2、CCL2、MMP3、IL1B、IKBKB、NFKBIA、FOS、IL6、TNF,拟对该通路中的相关靶点进行后续实验验证。3.靶点临床水平验证:治疗前,治疗组和对照组患者血清中的炎症靶点TNF-α、IL-1β、COX2、IKBKB、CCL2的表达均高于正常组,经4周干预治疗后,上述炎症靶点在两组患者血清中的表达水平均呈下降趋势,且治疗组下降趋势优于对照组(P<0.05)。4.靶点细胞水平验证:AngⅡ刺激HUVECs的炎症反应,促进TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平升高,芍药苷及姜黄素干预后,均能有效控制上述细胞炎症因子的表达水平。
结论:丹皮姜黄方治疗不稳定型心绞痛血瘀气滞证临床疗效确切且无明显不良反应,控制炎症反应是丹皮姜黄方干预不稳定型心绞痛的重要机制,相关靶点包括TNF-α、IL-1β、COX2、IKBKB、CCL2、IL6等。本研究为丹皮姜黄方治疗不稳定型心绞痛的临床应用提供了理论和实验证据。