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蓖麻种子含有约50%-60%蓖麻油。蓖麻油作为理想的润滑油被广泛应用于机械、航空、塑料等行业,然而作为新型的生物柴油原料,要求有较高的油酸含量。而通过RNA干扰技术阻断油酸合成途径的下游支路使油酸积累,从而获得高油酸蓖麻是促进蓖麻作为生物柴油原料应用的有效途径。本研究分别克隆了蓖麻油酸合成代谢途径中的蓖麻油酸(FAH12)、亚油酸(FAD2)和超长链脂肪酸(FAE1)三个关键酶基因片段,构建同时干扰这三个基因的种子特异表达载体并进行遗传转化,获得以下研究结果:1、根据GeneBank上公布的蓖麻FAH12基因(XM00252808l)、FAD2基因(XM002530658)以及FAE1基因(XM002531584)序列,分别克隆了这三个基因保守序列中的片段,长度分别为162bp、250bp和332bp,并将这三个片段连接成一个复合片段,命名为Fahde.2、首次构建了蓖麻中同时干扰三基因的种子特异表达载体:将复合片段Fahde正反方向插入含种子特异启动子Albumin的pFGC1008载体中,构建了FAH12、FAD2和FAEl基因的RNA干扰载体,同时沉默这三个基因。3、建立了蓖麻离体再生体系:以蓖麻品种淄5号和秀蓖2号的成熟种子胚轴为外植体,在含TDZ的改良MS培养基上,平均每个外植体可产生4个不定芽。不定芽经伸长、诱导生根而发育成完整的植株。淄5号和秀蓖2号在产生不定芽数量及根分化能力上没有明显差异,说明这两个蓖麻品种基因型对体外再生体系的建立没有明显影响。4、初步建立了蓖麻遗传转化体系:以黑暗条件下预培养5天的种子胚轴为外植体,经OD600值0.2-0.5的农杆菌重悬液浸染10min并共培养3天后,转至20mg/L潮霉素浓度培养基中进行筛选。从种子萌发到诱导抗性苗生根的过程需要约75天。抗性苗通过PCR检测证明为转基因植株。5、三基因干扰载体转化蓖麻淄5号的结果:通过农杆菌介导法,共筛选得到抗性苗64株,其概率为5.12%,获得1株转基因苗,转化率为0.08%。