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研究目的:炎性微环境在以显著的纤维炎症反应为特征的胰腺癌发病中起重要作用。STAT3通路是公认的连接炎症与肿瘤的“桥梁”,参与了胰腺癌的发生发展。近年来,有关JAK/STAT通路关键的负反馈调节因子-SOCS3在各种肿瘤中的研究越来越多,但胰腺癌相关的报道较少。本研究旨在探索胰腺癌中SOCS3的表达调控机制及其作用,为治疗提供新的理论基础和潜在的治疗靶点。研究方法:1、通过Western blot和IHC检测IL-6/pSTAT3/SOCS3通路及DNMT1/DNMT3a在胰腺癌及配对的癌旁组织、细胞株中的表达差异。2、通过Western blot和qRT-PCR研究了炎性细胞因子IL-6及STAT3活性抑制剂S3I-201对胰腺癌细胞SOCS3及甲基化转移酶DNMT1/DNMT3a表达的影响。3、通过MSP检测IL-6及S3I-201对SOCS3基因启动子区甲基化状态的影响,并研究5-Aza-cdR处理及DNMT1基因敲除对IL-6诱导的SOCS3蛋白表达的影响。4、通过免疫共沉淀及双荧光素酶报告基因实验探索IL-6/STAT3通路及DNMT1对SOCS3基因启动子区的转录调节作用。5、通过增殖凋亡、周期、迁移、侵袭、裸鼠成瘤等实验观察SOCS3基因对胰腺癌细胞生物学行为的影响。6、利用人胰腺癌组织芯片验证SOCS3表达与胰腺癌的临床病理特征及预后的相关性。研究结果:1、胰腺癌组织中IL-6、pSTAT3及DNMT1表达上调,SOCS3表达下调。2、IL-6通过活化STAT3信号通路促进DNMT1的表达及胰腺癌细胞DNA整体甲基化水平的提高;STAT3活化可负性调控SOCS3表达。3、STAT3活化促进了SOCS3基因启动子的高甲基化;沉默DNMT1表达或5-Aza-cdR可逆转IL-6/STAT3信号通路介导的SOCS3表达下调。4、磷酸化的STAT3可募集DNMT1至SOCS3的启动子区并抑制SOCS3基因的转录活性。5、过表达SOCS3可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和成瘤能力,其可能机制包括诱导G1/S细胞周期阻滞、促进凋亡、抑制STAT3活化及其下游靶基因的表达。6、SOCS3低表达与胰腺癌淋巴结转移及AJCC临床分期进展期相关,SOCS3高表达提示胰腺癌患者术后预后相对较好。研究结论:炎性因子IL-6通过活化STAT3信号通路诱导DNMT1甲基化抑制SOCS3基因的表达,进而导致STAT3通路的失衡及持续活化。SOCS3的表达降低促进了胰腺癌的生长及转移。靶向IL-6/STAT3信号通路及DNMT1的治疗可成为胰腺癌重要的治疗策略。