目的:肿瘤的免疫治疗是一种有前途的疗法,肿瘤DNA疫苗是肿瘤免疫治疗的一种重要策略之一。存活素（survivin）是一种肿瘤相关抗原,在多种肿瘤细胞中过表达。本研究的目的是构建基于含6个组氨酸标签（His₆）的小鼠存活素（Survivin）的真核表达载体,并在真核细胞中的进行表达鉴定,为基于存活素的肿瘤DNA疫苗的研究打下基础。方法:根据小鼠Survivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆Survivin的cDNA,并进一步构建分泌型Survivin的真核表达载体,经测序鉴定后在大肠杆菌中扩增重组载体,然后转染HeLa细胞,进行表达活性分析;获得的培养上清以金属离子螯合层析富集,再用免疫印迹法鉴定Survivin的表达.结果:从小鼠脾脏总RNA中克隆到Survivin的cDNA编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同。然后,进一步构建了氨基端融合小鼠IL-2（白细胞介素-2,Interleukin-2）信号肽,羧基端带有His₆标签的Survivin真核表达载体,经测序验证重组载体的序列正确。在大肠杆菌中扩增重组载体,转染HeLa细胞,细胞上清经HisTrap HP柱层析富集后,进行免疫印迹分析,表明Survivin以分泌型方式在HeLa细胞中获得表达。结论:成功克隆小鼠Survivin的cDNA,并进一步构建带有信号肽序列的分泌型Survivin真核表达载体,从而可供进一步开展基于Survivin的肿瘤DNA疫苗的研究。