华支睾吸虫病是由华支睾吸虫引起的一种食源性人兽共患寄生虫病，主要引起一系列的肝胆病变。在2009年，华支睾吸虫被归为第Ⅰ类生物性致癌因子。主要分布于韩国，中国，俄罗斯和越南，全球将近有3500万人感染，仅中国就占1500万余人。尽管国内外对该病的防治进行的大量的研究，由于华支睾吸虫存在不同的发育时期而且抗原成份复杂，寻找特异、敏感的适宜免疫学诊断的抗原并非易事。因此，华支睾吸虫病的免疫学诊断的发展方向主要是开发新的华支睾吸虫高特异、高敏感的抗原或抗体，来改观现有的各种免疫学方法的不足，使其更加敏感、特异、高效、经济、方便和安全，在已有基础上建立新型的完善的免疫学诊断方法。本实验室已经成功地构建了华支睾吸虫成虫cDNA表达文库，利用免疫学方法筛选出了5种具有强反应原性的抗原基因，对筛选出的强反应原性抗原基因克隆进行测序，利用相关分子生物学软件进行序列分析。在此基础上，将筛选出的五种强反应原性抗原基因合成多肽，并将其分别命名为CsA1、CsA2、CsA3、CsA4、CsA5。由于人工合成的抗原均由10个左右的氨基酸组成，分子量小，免疫原性较弱，因此需要与大分子载体蛋白进行偶联。利用华支睾吸虫感染兔的阴阳性血清对牛血清白蛋白（BSA），鸡卵白蛋白（OVA），匙孔血蓝蛋白（KLH）三种载体蛋白进行特异性鉴定。从反应程度来看BSA是载体蛋白的最佳选择。将合成的多肽抗原送生物公司与载体蛋白进行偶联后，利用SDS-PAGE检验偶联产物表明已经偶联成功。五种偶联后的抗原分别被命名为8、9、10、11、12号。将该五种抗原每两周免疫一次家兔，首次利用弗氏完全佐剂，后面五次用弗氏不完全佐剂进行乳化，每次免疫后一周耳静脉采血测量其抗体效价。第六次免疫后心脏采血收集血清，ELISA检测结果表明9，10，12号抗体效价达到1：204800，而8，11号达到1：102400。利用硫酸铵沉淀法及亲和层析法，进行抗体纯化，除去了杂蛋白和抗血清中针对BSA产生的抗体。然后从自然感染华支睾吸虫的家犬中取出新鲜肝脏，收集华支睾吸虫成虫，利用间接免疫荧光法进行定位：CsA1分布在华支睾吸虫口吸盘和腹吸盘上，CsA2号分布在华支睾吸虫腹吸盘上，CsA3号分布在华支睾吸虫口吸盘和腹吸盘上，CsA4号分布于华支睾吸虫口吸盘，CsA5分布于华支睾吸虫口吸盘和腹吸盘。本实验对筛选出的5种抗原表位进行了免疫学定位，由于其分布的特殊性，推测其与华支睾吸虫成虫在宿主体内的吸附、移行等机制密切相关，如果能针对虫体与宿主的接触部位-口、腹吸盘，使其不能粘附在胆管壁上或其他腔道的壁上，则能把病原体排出体外，起到疫苗的作用。本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据，也为基因工程疫苗研制奠定了基础。