犬博卡病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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博卡病毒(Bocavirus)在临床上会引起多种动物及人的呕吐、腹泻等消化道症状,以及人、猪和牛的咳嗽、流涕等呼吸道症状。犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBoV)是在2012年被发现的新型病毒并且在世界范围广泛分布,已在中国、美国、德国、韩国、泰国、越南、香港等多个国家和地区被发现并报道。目前报道的犬感染CBoV后的主要症状为腹泻,但由于对CBoV的报道时间尚短,国内外尚缺乏丰富的地区性流行病学资料,且尚无针对CBoV的荧光定量PCR方法建立。本试验的目的是建立针对CBoV的荧光定量PCR检测方法,利用该方法对成都地区CBoV的感染情况进行分子流行病学调查,为疾病的防控和诊断提供基础支持。1.通过对反应体系、反应条件的优化,成功建立了基于SYBR Green I的CBoV荧光定量PCR检测方法。试验表明,方法具备良好的特异性、敏感性及重复性,最低检测限为3.73×10~1 copies·μL-1。2.应用建立的荧光定量PCR方法对2021年3月至11月自四川成都地区采集的共330份犬的粪便样本进行检测,结果表明:成都地区CBoV的总阳性率为20.61%(68/330)。3.感染相关因素分析表明:CBoV的感染与犬混血或纯血品种有关(P<0.01),在纯血品种犬只样本中检出率较高;CBoV的感染与犬年龄相关,12月龄以上的成年犬检出率分别与≤3月龄犬检出率、4~12月龄犬检出率相比存在极显著差异(P<0.01),≤3月龄犬的检出率44.68%(42/94)虽高于4~12月龄犬的检出率26.47%(18/68)但两者间无统计学差异(P>0.05);有肠道感染症状的犬检出率35.93%(60/167)显著高于无肠道感染症状的犬检出率4.91%(8/163)(P<0.01),显示CBoV的感染与犬肠道感染密切相关;犬只感染CBoV与免疫状况有关,未免疫犬的检出率显著高于已免疫犬的检出率(P<0.05);CBoV的感染与季节有关,春季的检出率高于其他三季的检出率且有极显著差异(P<0.01);犬的性别与CBoV的感染无关(P>0.05)。本研究首次建立了针对CBoV的荧光定量PCR检测方法,为CBoV的检测提供了快速灵敏的工具,同时丰富了成都地区犬群的CBoV分子流行病学资料,为CBoV的防控提供一定的参考数据。
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