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目的:探讨脊髓三组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)在神经病理性痛形成中的作用。
方法:
第一部分:取雄性SD大鼠4只,体重200-250g,用免疫组织化学的方法,测定脊髓L5节段三组代谢型谷氨酸受体mGluR4,mGluR7,mGluR8亚型的表达。
第二部分:(1)取雄性SD大鼠40只,建立神经病理性痛SNL模型后,随机分入5组:NS组,鞘内注射10ul的0.9%生理盐水;VU1组,鞘内注射125nmol/10ul的VU0155041;VU2组,鞘内注射250nmol/10ul的VU0155041;VU3组,鞘内注射500nmol/10ul的VU0155041;AP组,鞘内注射150nmol/10ul的L-AP4。用Von frey法和Hargreaves热辐射法测定给药后120min内大鼠的机械痛阈和热痛阈。(2)取雄性SD大鼠6只,体重200-250g,随机分入两组,健康对照组和SNL模型组,用免疫组化的方法测定其脊髓mGluR4的表达。(3)取雄性SD大鼠20只,体重200-250g,随机分入5组:术前组和术后1,3,5,7天组,用western blot的方法,测定mGluR4的表达。
第三部分:取雄性SD大鼠32只,建立神经病理性痛SNL模型后,随机分入4组:NS组,鞘内注射10ul的0.9%生理盐水;AMN1组,鞘内注射25nmol/10ul的AMN082;AMN2组,鞘内注射50nmol/10ul的AMN082;AP组,鞘内注射150nmol/10ul的L-AP4。用Vonfrey法和Hargreaves热辐射法测定给药后120min内大鼠的机械痛阈和热痛阈。(2)取雄性SD大鼠6只,体重200-250g,随机分入两组:健康对照组和SNL模型组,用免疫组化的方法测定脊髓mGluR7的表达。(3)取雄性SD大鼠20只,体重200-250g,随机分入5组:术前组和术后1,3,5,7天组,用western blot的方法,测定mGluR7的表达。
结果:
第一部分:免疫组化结果显示,健康大鼠脊髓L5节段,表达mGluR4和mGluR7,但不表达mGluR8。
第二部分:行为学结果显示,500nmol/10ul的VU0155041鞘内注射,可提高SNL模型大鼠的机械痛阈(P<0.01)和热痛阈(P<0.01),时间效应曲线和阳性对照药物L-AP4类似,但250nmol/10ul的VU0155041只能提高机械痛阈(P<0.01),125nmol/10ul的VU0155041对痛阈无影响。免疫组化结果显示SNL模型大鼠脊髓mGluR4表达较健康大鼠下调。western blot结果显示,造模后第七天mGluR4表达的下降出现显著性差异(P<0.05)。
第三部分:行为学结果显示,25nmol/10ul和50nmol/10ul的AMN082鞘内注射,对SNL模型大鼠的机械痛阈(P>0.05)和热痛阈(P>0.05)均无明显影响,免疫组化和western blot结果显示,SNL模型大鼠脊髓mGluR7表达与健康大鼠相比无显著性差异(P>0.05)。
结论:
脊髓L5节段主要表达三组mGluRs中的mGluR4和mGluR7,不表达mGluR8;激活脊髓mGluR4可抑制神经病理性机械痛敏和热痛敏;mGluR4表达的变化参与了神经病理性痛的形成;脊髓mGluR7在神经病理性痛的形成中无明显作用。