蜘蛛毒素多肽的种类丰富且功能多样,在杀虫、抑菌、医药等多方面应用广泛。在基础研究中,蜘蛛毒素多肽被用作药理学研究的工具试剂,如辅助离子通道作用机制的研究。白额高脚蛛毒素多肽仅对昆虫有毒杀作用,而对大鼠等无毒害,因而,白额高脚蛛毒素多肽是更具安全性的药物开发资源库。α2δ-1作为电压门控钙通道辅助亚基被发现,在神经元兴奋传递中起促进作用,与病理性神经痛的发生以及镇痛药物的耐药性密切相关。电压门控钙通道辅助亚基α2δ-1与白额高脚蛛毒素多肽相互作用的探究,可促进与慢性疼痛相关的药理机制发现与多肽新药开发等方面,是一种创新性探究。分裂泛素酵母双杂交系统是一种快速、高通量筛选膜蛋白质相互作用的技术,但蜘蛛毒素多肽属于较小的分泌蛋白,电压门控钙通道辅助亚基α2δ-1属于膜蛋白,现有的分裂泛素酵母双杂交系统无法直接应用于蜘蛛毒素多肽与电压门控钙通道辅助亚基α2δ-1相互作用的研究。因此将现有的分裂泛素酵母双杂系统进行改进,能极大地缩短蜘蛛毒素多肽与离子通道蛋白相互作用的研究周期,促进多肽与受体的靶向研究。本文的内容主要为两大部分,一是改进了现有的分裂泛素酵母双杂交系统,验证了该改进系统可应用于电压门控离子通道与蜘蛛毒素多肽相互作用的研究;二是应用改进的分裂泛素酵母双杂交系统,初步筛选了白额高脚蛛毒素多肽U5、U10、U13、U23、U25与U28中靶向作用于电压门控钙通道亚基α2δ-1的分子。主要结果如下:1、通过生物信息学手段分析获得了跨膜序列TP;利用同源重组法将跨膜序列TP插入到靶蛋白的C末端,构建了改进载体p PR3-SUC-TP;将p PR3-SUC-TP转入酿酒酵母NMY51,观察到跨膜序列TP对酿酒酵母NMY51无毒害作用;融合红色荧光蛋白m Cherry的跨膜序列TP,在酿酒酵母NMY51细胞膜上有表达;2、将敬钊缨毛蛛毒素多肽（JZTX-III）的成熟肽基因构建到p PR3-SUC-TP上,将钠离子通道Na V1.5的基因构建到p BT3-N上,通过改进的分裂泛素酵母双杂交系统验证JZTX-III特异作用于钠离子通道Na V1.5,实例验证了该改进系统的可靠性;3、利用同源重组法成功构建了诱饵载体p BT3-SUC-YFP-α2δ-1,观察到了黄色荧光蛋白,表明α2δ-1成功定位在NMY51细胞中;同时,构建白额高脚蛛毒素多肽U5、U10、U13、U23、U25与U28相关的猎物载体,并将其转入酿酒酵母NMY51,证明了六种白额高脚蛛毒素多肽对酿酒酵母NMY51无毒害作用。应用改进的分裂泛素酵母双杂交系统筛选到作用于电压门控钙通道辅助亚基α2δ-1的白额高脚蛛毒素多肽为U5、U23和U25。本论文在商业化的分裂泛素酵母双杂交系统的基础上,拓展了其在膜蛋白与分泌多肽的相互作用方面的研究。我们利用改进的系统筛选到了作用于电压门控钙通道辅助亚基α2δ-1的三个蜘蛛毒素多肽,这些靶向多肽可用于α2δ-1的分子功能研究和与之相关的药理学研究。