【摘 要】
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孔雀石绿(Malachite Green,MG)是一种具有抗菌杀虫作用的渔药,用于帮助水生动物抵抗病菌的侵害,以维持健康生长的状态,效果显著,被养殖户视为水产养殖特效药,但这种渔药也会残留于水产中产生严重的致癌致畸性,经由食物链对人类健康造成严重的威胁。尽管如此,这种渔药的滥用现象仍普遍发生,屡禁不止,因此,针对水产养殖业中孔雀石绿的残留检测至关重要。现有的针对孔雀石绿残留的检测技术有色谱法、免疫
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孔雀石绿(Malachite Green,MG)是一种具有抗菌杀虫作用的渔药,用于帮助水生动物抵抗病菌的侵害,以维持健康生长的状态,效果显著,被养殖户视为水产养殖特效药,但这种渔药也会残留于水产中产生严重的致癌致畸性,经由食物链对人类健康造成严重的威胁。尽管如此,这种渔药的滥用现象仍普遍发生,屡禁不止,因此,针对水产养殖业中孔雀石绿的残留检测至关重要。现有的针对孔雀石绿残留的检测技术有色谱法、免疫分析法、光谱法、电化学法等。上述方法虽然选择性好、灵敏度高,但检测过程中需要外部仪器的辅助、过程繁琐、耗时长、需要相关技术人员操作等,这些问题限制了其应用与推广。胶体金免疫层析试纸条是一种快速便携的比色试纸条,它结果可视、选择性好、操作方便,被广泛用于各类待测目标的现场快速检测,发展前景十分广阔。目前,已有大量孔雀石绿试纸条被正式投入使用,但现有市售的试纸条存在灵敏度低,价格昂贵等不足,难以满足市场需求。针对上述不足,本文以具备高比表面积的静电纺纳米纤维膜为载体,固载特异性识别元件(适配体)与光学性能优异的显色元件(纳米金),成功构建了基于静电纺纳米纤维膜的试剂盒,用于养殖水体中孔雀石绿残留的可视化检测。本文的主要研究内容如下:(1)通过静电纺丝技术制备了表面形貌良好的聚乙烯醇-乙烯共聚合物(PVA-co-PE)静电纺纳米纤维膜,然后对纤维膜进行活化处理得到对应的亲和膜,试剂采用三聚氯氰、戊二醛和N,N’-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(N,N’-Disuccinimidyl carbonate,DSC)。对经不同活化处理的亲和膜的表面形貌、机械性能、亲水性以及芯吸性能等进行了系统的研究,并探讨了链霉亲和素的初始浓度与pH值对其在不同纳米纤维膜表面吸附性能的影响。(2)将四氯金酸在加热条件下用柠檬酸三钠还原,成功制备得到纳米金粒子。合成的粒子分散性好、形状均一。将该纳米粒子与孔雀石绿的RNA适配体偶联,形成纳米金-适配体偶联物,并通过透射电镜分析、紫外光谱测试、粒径分布测试、Zeta电位等进行表征,结果显示结合后的纳米金-适配体偶联物具备一定的稳定性,对目标物质孔雀石绿具有特异性识别能力。(3)将不同活化处理的亲和膜组装成试纸条,固载纳米金-适配体偶联物和DNA探针等组成最终检测用试剂盒。通过一系列优化筛选,最终结果显示,经DSC活化处理的亲和膜的裸眼检测限达到0.0015μg/m L(1.5 ppb),该试剂盒具备选择性识别能力,可用于实际养殖用水中MG残留的检测。
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