玉竹凝集素(polygonatum odoratum(Mill.)Druce lectin,POL)的纯化、性质和构象研究

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本文对玉竹凝集素(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce lectin,POL)的研究主要包括分离纯化、性质、活性以及结构几个方面。百合科植物玉竹的根状茎经高速组织粉碎机粉碎,生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀透析除去硫酸铵得到玉竹凝集素粗品,将粗品过阳离子交换柱CM-Sepharose和SephacrylS-200凝胶过滤层析得到玉竹凝集素纯品。经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基分子量为14.2KD,用SephacrylS-100凝胶过滤测得其表观分子量为48KD,表明POL是由四个相同亚基组成的蛋白质。POL能凝集兔血红细胞,其凝集兔血细胞效价为3.9ug/ml。糖抑制实验结果表明,甘露聚糖是POL的凝血活性的专一性抑制糖,其它的糖类对其凝血活性的影响不明显。 POL的荧光光谱研究表明:在激发光为280nm时,其最大荧光发射峰位在328nm处,荧光光谱未见有酪氨酸(Tyr)残基的发射峰,表明Tyr残基的荧光基本上通过能量转移到Trp上,并使荧光强度增强,在激发光谱为295nm时,其最大荧光发射峰位也在328nm处,比游离Trp的最大荧光发射峰(348nm)蓝移了近20hm,说明Trp周围的极性较弱,处于疏水的微环境。研究不同温度和不同pH条件下玉竹凝集素的凝血活性和荧光光谱的变化表明,当温度达到60℃时,30分钟后其仍保留80%的凝集活性,当温度逐渐上升时,活性随着温度的升高而逐渐丧失,当温度达到100℃时,20分钟内其活性完全丧失。荧光光谱研究表明,其荧光强度随着温度的升高逐渐增强,并且最大发射波长峰位发生红移,表明该凝集素的构象发生了一定变化,即荧光基团所处微环境的极性增强。不同pH的活性研究表明,POL在Ph3—9范围内活性比较稳定,在pH5.6
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