论文部分内容阅读
茶树[Camellia sinensis（L.）O.Kuntze]原产于中国，现已成为一种世界性的重要经济作物。近年来分子标记等分子生物技术在茶树领域中的研究，取得了一定进展。AFLP技术是90年代兴起的一种分子标记，以其稳定性好、重复性高、覆盖面广、多态检出率高等优点被迅速且广泛地运用于生命科学的各领域中。本研究采用AFLP技术对25个广东地方茶树群体品种和5个对照品种进行遗传多样性分析和种质鉴别研究，并对乐昌白毛茶群体内各单株的遗传多样性进行分析。主要研究结果如下： 1、采用氯仿：异戊醇一次抽提法提取茶树基因组DNA，再经纯化，获得用于AFLP子标记的模板DNA。结果表明，此法提取的DNA其OD260／OD280值在1.60～1.85之间，相对分子量≥23kb，且能被EcoR Ⅰ酶解完全，并能获得清晰PCR图谱和AFLP指纹图谱。此DNA提取方法快速、高效、经济，提取的DNA质量好，特别对样品数量多、工作量大等情况下的研究尤为适用。 2、用AFLP技术对25个广东茶树群体品种和5个对照品种进行遗传多样性分析，获得清晰可见的DNA指纹图谱。结果表明，5对引物共扩增出401条带，平均每对引物扩增80.2条带，多态性条带338条，占总带数的84.3％。扩增片段大小在50～580bp之间。30个茶树群体品种之间遗传相似性以清凉山茶和清远笔架茶最高（0.87248），桂北大叶种和凤凰水仙之间最低（0.50000），清凉山茶和清远笔架茶遗传距离最小（0.12752），桂北大叶种和凤凰水仙之间的遗传距离最大（0.50000）。本实验结果表明广东茶树群体品种遗传多样性十分丰富。采用DPS 2000软件中的UPGMA法，对实验数据进行聚类分析，得到AFLP聚类图。在遗传距离为0.40处取一结合线，可以将30个茶树品种分为3大类，分别是：第一类包括凤凰水仙、石古坪乌龙、南昆山白毛茶、连南大叶、丰顺马图茶、东源山菀茶、清凉山茶、清远笔架茶、五华天竺山茶、广州小叶青心、阳春白毛茶、高州白心、惠阳小叶、罗定小叶、普宁小叶、云南大叶、海南大叶、广州青桂大叶、兴宁官田茶、乐昌苦茶；第二类类包括乐昌白毛茶、仁化白毛茶、乳源白毛茶、台山白云茶、凌云白毛茶、广州小叶白心、广宁大叶青心、平远锅了茶；第三类包括桂北大叶和江西宁州种两个茶树品种。从聚类结果可以看出，广东地方群体品种亲缘关系的多元性和相对集中性。 3、利用5对引物对乐昌白毛茶各单株和5个对照品种进行AFLP分析，获得清晰可见的DNA指纹图谱。共扩增出345条带，平均每对引物扩增69条带，多态性条带257条，占总带数的74.5％。扩增片段大小在50～580bp之间。本实验结果表明乐昌白毛茶品种内遗传多样性比较丰富，但品种内的多态性条带低于品种间（84.3％）。17个样本的遗传距离分析表明，以4号单株和1号单株的遗传距离最大（0.60129），桂北大叶种和江西宁州种的遗传距离最小（0.17647）。从聚类图上可以看出，在遗传距离为0.54处取一结合线，可以将17个样本分为3大类，3号单株和4号单株单独分开聚类，5个对照品种与其他单株