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目的：建立化疗耐药的人涎腺腺样囊性癌细胞系,检测其耐药特性并初步探讨青蒿琥酯(Artesunate,ART)对耐药细胞是否具有增殖抑制及耐药逆转作用。方法：以人涎腺腺样囊性癌NACC为亲本细胞,采用恒定3 μM顺铂(Cisplatin,DDP),周期性作用的方法建立DDP耐药的腺样囊性癌细胞系；光镜、电镜观察耐药细胞的形态学改变；MTT法检测其多药耐药性；平板克隆形成实验检测单个细胞增殖能力；MTT法绘制细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期分布情况；实时荧光定量PCR法检测细胞中耐药相关基因survivin、MRP2、ERCC1、CTR1的mRNA表达；Western Blot法检测细胞中耐药指标survivin、MRP2、CTR1的表达。观察ART对耐药细胞增殖的影响,计算其IC50及IC05值, 在IC05以下选择下列浓度37.5、75、150μM作为逆转浓度,并选择1/2 IC50(600μ M)作对照浓度进行后续实验；ART干预亲本及耐药细胞48 h后,光镜、电镜观察细胞形态改变；MTT法检测37.5、75、150μMART对耐药细胞的DDP耐药逆转作用；流式细胞仪检测37.5、75、150μM ART干预48 h后对亲本细胞及耐药细胞细胞周期的影响；Annexin V/PI双染法检测37.5、150、600 μ M的ART干预48 h后对亲本及耐药细胞细胞凋亡的影响；实时荧光定量PCR法检测37.5、75、150、600μ M的ART干预耐药细胞48 h后survivin、MRP2、ERCCl的mRNA表达变化；Western Blot法检测37.5、75、150、600μ M的ART干预耐药细胞48 h后survivin、MRP2的蛋白表达变化。结果：1.历时7个月初步建立耐药性较稳定的腺样囊性癌耐药细胞系,命名为NACC/DDP,光镜下见NACC/DDP细胞体积较NACC明显增大,可见多个核仁,呈不规则多角形。透射电镜下见NACC/DDP细胞核仁增多,胞浆中粗面内质网大量增生,同时可见大量脂滴及少量溶酶体。2.MTT结果显示NACC/DDP细胞不但对DDP产生了耐药性,耐药指数为2.16,而且对博来霉素、长春新碱也产生不同程度的交叉耐药,耐药指数分别为1.99和1.97。NACC/DDP细胞的克隆形成率(32.08±2.82)%显著高于NACC细胞(23.52±2.72)%(P<0.01)。细胞生长曲线显示NACC/DDP细胞生长速度快于NACC。与NACC细胞相比,NACC/DDP细胞的G0/G1期增加,S期和G2/M期减少。3.NACC/DDP细胞中survivin、MRP2、ERCCl、CTR1的mRNA表达较NACC细胞上调。NACC/DDP细胞中survivin、MRP2、CTRl的蛋白表达较NACC细胞上调。4.随浓度增加,ART对NACC/DDP细胞增殖抑制作用增强,ART对NACC/DDP细胞的IC50为1258.52±36.87 μ M,IC05为166.86±49.84 μ M,选择药物逆转浓度为150、75、37.5 μ M,同时取1/2 IC50近似值600 μ M作对照。光镜下见逆转浓度各组NACC/DDP细胞仅有轻度形态变化,而600μ M组可见大部分细胞死亡。经150μM ART干预后,透射电镜下见NACC及NACC/DDP细胞较加药前细胞表面微绒毛明显减少,线粒体出现不同程度肿胀,胞质呈不同程度空泡化改变,NACC细胞线粒体肿胀较NACC/DDP细胞严重。耐药逆转实验结果显示除37.5 μM外,75 μM和150μM ART可不同程度降低DDP对NACC/DDP细胞的IC50(P<0.05),部分逆转NACC/DDP细胞对DDP的耐药性,耐药逆转指数分别为1.29倍和1.70倍。5.流式细胞仪结果显示,37.5、75、150μM ART作用于NACC及NACC/DDP细胞后,在加药组,随ART浓度增加,G0/G1期呈下调趋势,S期和G2/M期呈上调趋势,且同一浓度ART对两种细胞的细胞周期影响基本相同。37.5、150、600 μ M ART均可不同程度促进NACC及NACC/DDP细胞凋亡,且随药物浓度增加,凋亡率逐渐升高,相同浓度ART对NACC细胞凋亡率略高于NACC/DDP细胞,但差异尚无统计学意义。6.37.5、75、150、600μM的ART干预NACC/DDP细胞后,随ART浓度增加,survivin、MRP2、ERCCl的mRNA表达量均呈下调趋势。。37.5、75、150、600 μM的ART干预NACC/DDP细胞后,survivin、M RP2的蛋白表达水平均显著下调。结论：1. NACC/DDP细胞具有多药耐药特性,属于低等耐药。与亲本细胞NACC相比,其克隆形成率、生长速度、G0/G1期均显著增加,而S期和G2/M期减少。NACC/DDP细胞中耐药相关指标survivin、MRP2、ERCC1表达上调,可能与NACC/DDP细胞系产生多药耐药性有关。2.ART在体外能抑制NACC/DDP细胞的增殖,有效逆转NACC/DDP细胞对DDP的耐药性,可将NACC/DDP细胞阻滞于S期和G2/M期,诱导NACC/DDP细胞凋亡,ART能显著下调NACC/DDP细胞中survivin、MRP2.ERCC1的mRNA表达及下调survivin、 MRP2的蛋白表达,可能与其逆转NACC/DDP细胞对DDP的耐药性有关。