近年来,随着恶性肿瘤的发病率逐年递增,其对于人类生命健康的损害也得到了人们密切的关注。其中,乳腺癌的发生率和死亡率均居女性恶性肿瘤的首位,使其成为了恶性肿瘤中对女性生命健康的头号杀手。而中医药作为先人留给我们的巨大宝库,使用现代医学和药理学手段进行研究,可进一步发掘新型抗肿瘤药物及活性物质,达到预防和治疗恶性肿瘤的目的。同时,多种中医药联合常用化疗药物使用时,可有增效减毒、预防耐药等效果,因此开发传统药物或活性物质对于肿瘤的治疗亦有重要意义。本研究以黄芩中的活性成分黄芩素为主要研究对象,其虽然具有多种生理活性,但其对人乳腺癌的作用机制尚不完全明确。因此本实验对黄芩素及乳腺癌一线用药多西他赛联合进行了体外抗肿瘤的研究,探究黄芩素抑制肿瘤细胞增殖的机制,本研究结果将为中药材黄芩及其有效活性成分的开发利用提供基础理论依据。目的:基于人乳腺癌MCF-7细胞株,分别使用多西他赛、黄芩素、多西他赛+黄芩素两药联合处理,研究药物处理后细胞株的生物活性,并进一步深入研究不同药物发挥抗肿瘤作用的机制。方法:1.以人乳腺癌MCF-7细胞株为实验研究的对象,采用CCK-8法测定不同浓度的多西他赛单药、黄芩素单药处理特定时间后细胞的抑制率及细胞活性。并根据所得出实验数据进一步检测多西他赛+黄芩素两药联合处理人乳腺癌MCF-7细胞株特定时间后细胞的抑制率及细胞活性,根据公式计算其是否具有协同作用。2.根据CCK-8结果,选取合适药物浓度及处理时长。采用Annexin V-PI双染,通过流式细胞检测仪检测药物处理后的人乳腺癌MCF-7细胞株凋亡率。采用PI(碘化丙啶)单染,通过流式细胞检测仪检测药物处理后的人乳腺癌MCF-7细胞株凋亡周期。3.采用蛋白印迹法(Western blot)检测MAPK/JNK通路相关蛋白JNK、p-JNK、p53、Caspase-3、Caspase-9的表达水平,从而探索黄芩素、多西他赛联合黄芩素抗肿瘤的途径及机制。结果:1.多西他赛单药、黄芩素单药对人乳腺癌MCF-7细胞株的生长具有抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性。不同浓度的黄芩素联合多西他赛时的浓度对人乳腺癌MCF-7细胞株的生长具有抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性,且黄芩素能够增强多西他赛对人乳腺癌MCF-7细胞株的增殖抑制作用,根据浓度的不同两药联合具有相加或协同的作用。2.流式细胞仪检测结果指出黄芩素能够显著增强多西他赛诱导人乳腺癌MCF-7细胞株凋亡的作用,其凋亡机制可能与多西他赛阻滞人乳腺癌MCF-7细胞株于G2/M期、黄芩素单药组和多西他赛+黄芩素两药联合组均阻滞人乳腺癌MCF-7细胞株于G0/G1期有关。3.Western blot实验表明多西他赛单药可促进P53基因的表达,增加Caspase-3、Caspase-9蛋白的剪切,增加JNK蛋白的表达,但对其磷酸化的p-JNK蛋白表达水平无影响。黄芩素单药可促进P53基因的表达,增加Caspase-3、Caspase-9蛋白的剪切,增加p-JNK蛋白的表达水平。多西他赛+黄芩素两药联合可显著增加Caspase-3蛋白的剪切,增加p-JNK蛋白的表达水平。说明多西他赛+黄芩素两药联合可促进P53基因的表达,并通过MAPK/JNK通路增加增强Caspase-3和Caspase-9蛋白的剪切激活,最终增强多西他赛促人乳腺癌MCF-7细胞株凋亡的作用。结论:研究数据表明了黄芩素单药具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞株生长并诱导其凋亡的作用,其作用机制可能是通过调节MAPK/JNK信号通路促进P53基因的表达、激活Caspase家族的Caspase-3和Caspase-9蛋白、阻滞细胞周期等,最终诱导人乳腺癌MCF-7细胞株生长抑制及细胞的凋亡。同时,黄芩素与多西他赛两药联合抗肿瘤具有协同作用,这可能也与MAPK/JNK信号通路有关。