论文部分内容阅读
背景:慢性胃炎是消化系统的一种常见病,是不同原因导致的胃黏膜层炎症。其中,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染是慢性胃炎最常见的病原学因素,H.pylori感染过程中会启动免疫系统,引起胃黏膜的炎症反应,单核巨噬细胞是参与炎症反应的重要的免疫细胞,具有吞噬、清除异物和抗原呈递的功能,在固有免疫应答中扮演着重要的角色。单核巨噬细胞可分为经典活化型(classically activated,M1)和替代活化型(alternatively activated,M2)。M1样单核巨噬细胞可以产生和释放如IL-12等多种促炎细胞因子,用来清除病原体及肿瘤细胞。M2样单核巨噬细胞可以产生抗炎细胞因子,如IL-10及其他免疫调节的因子,主要起抗炎、组织修复和促进肿瘤生长的作用。不同的疾病使单核巨噬细胞处于的极化状态不同,其发挥的作用也不尽相同。单核巨噬细胞是机体抗H.pylori免疫的第一道防线,H.pylori进入机体后能否存活或复制,与巨噬细胞的功能状态密切相关。然而,单核巨噬细胞在H.pylori感染中所处的极化状态及其在发病机制中的作用知之甚少。另外,单核巨噬细胞也参与肿瘤免疫过程,可以通过释放许多趋化因子促进肿瘤生长、侵袭和转移,循环中单核细胞可能会反映肿瘤相关巨噬细胞的激活状态,单核细胞亚群能否协助判断胃癌,尤其是H.pylori相关性胃癌的病情和预后仍未有报道。目的:研究新发H.pylori阳性慢性胃炎患者单核细胞各亚群表型特征、数量和相关细胞因子的水平。此外,我们探究以上各细胞亚群及细胞因子与疾病严重程度之间潜在的关系。另外,探索胃癌(H.pylori阳性和阴性)患者外周血M2样单核细胞亚群的数量的变化,以及其与疾病严重程度及预后的关系。方法:(1)联合14C-尿素呼气试验和血清免疫印迹法检测是否存在H.pylori感染,收集40例H.pylori阳性的慢性胃炎患者、15例H.pylori阴性的慢性胃炎患者以及14例健康体检者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)。流式细胞术检测PBMC中单核细胞各亚群数量的变化。微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测血浆中IL-12和IL-10的浓度。免疫组化方法检测CD64+和CD163+巨噬细胞在胃黏膜的表达。流式分选H.pylori感染者和未感染者的单核细胞并进行体外刺激培养,检测其分泌白介素的水平和吞噬功能。(2)收集76例新发胃癌患者、35例良性胃病和14例健康体检者的肝素钠抗凝外周血,分离PBMC。流式细胞术检测PBMC中M2样单核细胞亚群的水平。记录所有患者的临床、病理和实验室指标。结果:(1)与H.pylori阴性胃炎组和健康对照者相比,免疫组化结果发现H.pylori阳性慢性胃炎患者CD64+、CD163+巨噬细胞的浸润较多。H.pylori阳性慢性胃炎患者外周血中CD14+CD163-CD64+及CD14+CD163-IL-12+M1样单核细胞数量和血浆IL-12明显增多,且CD14+CD163+CD206+M2、CD14+CD163+CD209+M2和CD14+CD163+IL-10+M2样单核细胞数量及血浆IL-10水平也伴有升高。患者经过抗H.pylori治疗CD64+M1、CD206+和CD209+M2样单核细胞明显减少。(2)与慢性非萎缩性胃炎和萎缩性胃炎组比,消化性溃疡组患者外周血CD14+CD163-CD64+M1、CD14+CD163+CD209+M2样单核细胞水平明显升高;此外,H.pylori阳性患者的细菌载量与CD14+CD163+CD209+M2样单核细胞亚群数量呈正相关。Cag A+或Vac A+的患者外周血CD14+CD163+CD206+、CD14+CD163+CD209+和CD14+CD163+IL-10+M2样单核细胞明显高于Cag A-或Vac A-的患者。(3)体外刺激外周血中分选出的CD14+单核细胞,诱导出M2型巨噬细胞。与H.pylori阴性组比较,H.pylori阳性组CD163和CD206表型的表达和分泌IL-10的水平升高,吞噬能力降低。(4)胃癌患者中,H.pylori阴性组和H.pylori阳性组之间外周血CD14+CD163+M2、CD14+CD163+CD206+M2样单核细胞数量无显著差异,且两组在临床、病理和实验室指标上亦无明显差异。(5)与良性胃病及健康体检者相比,胃癌患者CD14+CD163+、CD14+CD163+CD206+M2样单核细胞数量均明显增高,胃癌切除术后CD14+CD163+和CD14+CD163+CD206+M2样单核细胞亚群较治疗前均明显下降。且CD14+CD163+、CD14+CD163+CD206+M2样单核细胞数与肿瘤浸润深度、淋巴结侵及、远处转移和TNM分期密切相关。(6)利用ROC曲线分析得出CD14+CD163+和CD14+CD163+CD206+M2样单核细胞水平在曲线下面积均大于CEA和CA199。其中,CD14+CD163+M2样单核细胞亚群的水平诊断胃癌的价值高于CEA和CA199。(7)Kaplan-Meier单因素生存分析表明,CD14+CD163+、CD14+CD163+CD206+M2样单核细胞、TNM分期、治疗与否、分化程度和H.pylori感染是胃癌不良预后的影响因素,COX多因素生存分析得到治疗与否、CD14+CD163+M2样单核细胞数、TNM分期和H.pylori感染是预测胃癌患者不良预后的独立因素。结论:(1)H.pylori感染所致慢性胃炎患者外周血中M1/M2样单核细胞混合性存在,CD64+M1、CD206+和CD209+M2样单核细胞亚群可能参与H.pylori相关慢性胃炎的发生发展过程。(2)对于H.pylori所致慢性胃炎患者,CD14+CD163+CD209+M2样单核细胞数量可能对于评估病情和细菌载量有重要价值。(3)外周血CD14+CD163+M2样单核细胞数可能是评估胃癌疾病严重程度及判断预后的潜在的新指标。