目的 通过重组9型腺相关病毒(rAAV9)载体介导R65核酶基因对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行转染,观察R65核酶基因表达对高脂血清刺激后HUVECs增殖和凋亡的影响.方法 体外培养HUVECs,高脂血清诱导建立动脉粥样硬化内皮损伤模型,重组rAAV9介导抗核因子(NF)-κB核酶基因(rAAV9-R65)腺相关病毒载体转染HUVECs.实验分为3组:(1)正常对照组;(2)高脂血清诱导组;(3)高脂血清诱导+病毒转染组.通过Western blot检测HUVECs细胞中p65核蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NF-κB信号通路下游肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的变化;Alamar Blue法检测rAAV9-R65转染后HUVECs的体外增殖;rAAV9-R65转染细胞96 h后流式细胞仪检测高脂血清刺激后HUVECs凋亡率的变化.结果 高脂血清诱导HUVECs 24 h后,细胞由卵圆形铺路石样逐渐变成类圆形,Western blot检测显示p65的表达水平分别为:空白组:0.0229 ±0.0024;高脂血清诱导组:0.224 3±0.008 6;rAAV9-R65转染+高脂血清诱导组:0.071 4 ±0.007 0.HUVECs细胞中高脂血清诱导后p65蛋白表达明显增高,而病毒转染后p65水平降低.ELISA检测结果显示HUVEC分泌的TNF-α水平3组分别为:15.98 ±0.43、27.94±0.83、19.73±0.43.而3组IL-6水平分别为:3.94 ±0.12、6.32 ±0.21、5.08 ±0.12.高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的分泌显著高于空白组,而rAAV9-R65干预+高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的浓度明显降低.Alamar blue法检测显示R65基因表达能明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制.流式细胞术检测显示与空白组比较,高脂血清诱导后细胞早期凋亡比率为20.4％,晚期凋亡比率为4.7％;而rAAV9-R65转染+高脂血清诱导组早期凋亡比率降至7.2％,晚期凋亡比率降为2.9％,证明R65表达可明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的凋亡.结论 R65基因表达能有效减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制,并能抑制高脂血清诱导的HUVECs凋亡。