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摘要以三唑磷为例，根据三唑磷引起的渔业污染事故所产生的一些现场情况、鱼类死亡特征及死亡顺序，结合实验室模拟鱼类三唑磷中毒的毒性试验，用气相色谱法测定事故中水样及生物样中三唑磷含量效果较好，可应用于渔业污染事故调查。
关键词三唑磷；渔业污染事故；气相色谱法
中图分类号S851.34+7文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）23-119-02
Abstract Taking triazophos as an example， based on describing fishery pollution accident caused by triazophos， fish mortality and death sequence， combined with toxicity experiment， using GC method to determine content of triazophos in water and biology is good， which can be used in fishery pollution accident investigation.
Key words Triazophos； Fishery pollution accident； GC
近年來随着海水养殖的不断发展，养殖过程中药物的使用也开始泛滥，养殖户为了保护养殖产品不受敌害生物的侵害并达到最大的经济效益，使用大量的药物清除敌害生物，从而导致养殖生物体内的药物残留增加，也可能殃及其他的养殖生物和天然资源。在浙江沿海滩涂养殖中广泛使用三唑磷就是典型例子。三唑磷对不同种类海洋生物的毒性不同[1-2]，控制一定的三唑磷浓度，可以清除对三唑磷比较敏感的生物，如一些鱼类、虾蟹类，而保留了不敏感的生物，如一些贝类。20世纪80年代后期以来，滩涂贝类幼苗养殖大量使用三唑磷，贝类成活率明显提高；在围塘养殖中也使用三唑磷清塘来提高养殖生物的成活率。目前，三唑磷的使用泛滥，甚至在泥螺起捕时也使用三唑磷以提高采捕效率。然而，被清除的敌害生物是一些敏感鱼类和虾蟹类，是附近张网、插网、串网等不同作业的渔获物，甚至出现在围塘和网箱养殖生物中。因此，海水养殖生物的死亡必然引起不同作业渔民之间的矛盾纠纷，调查、鉴定该类事故原因便成为一项涉及社会稳定的重要工作，具有明显的社会和经济意义。
该类事故一旦发生，与其他渔业污染事故类似，必须在事故现场根据养殖生物死亡与水质特征调查取证，作出初步判断，分析可能的污染原因及主要污染因子，控制污染源，为进一步深入调查赢得主动。回实验室后，通过实验室内的定性、定量分析查找有关的污染物对水生生物的毒性试验资料，在没有相应资料的情况下，应进行相应的污染物对养殖生物的毒性试验以取得理论依据，最后对所获得的资料进行综合分析，得出科学、有说服力的结论。鉴于此，笔者针对调查、鉴定的几起三唑磷引起的污染死鱼事故，介绍了农药引起的渔业污染事故调查方法，以期为渔业污染事故鉴定提供参考。
1鱼类三唑磷中毒特征
鲈鱼三唑磷中毒时，鱼嘴张开，鳃盖外翘，鱼体颜色明显加深，口内出血，该现象在浙江虾峙围塘养殖鲈鱼和苍南网箱养殖鲈鱼的死亡事故中都能观察到。在实验室模拟毒性试验，三唑磷中毒时，鱼类出现烦躁不安、跳跃撞壁、鳃盖鼓起、游动速度减慢，鱼体明显出血直至死亡，试验时不断充气，水体没有缺氧的可能，推测该症状可能是三唑磷毒性表现为接触损害，鳃受损造成呼吸困难。嘴巴张开、鳃盖外翘是三唑磷引起鲈鱼死亡最明显的特征。现场死鱼特征与上述描述相吻合，为死鱼的鉴定提供重要证据。
三唑磷中毒和其他有机磷农药中毒症状有所不同，其他有机磷农药中毒时鱼体腹部肿大，具有程度不同的积水肿腹，并且鱼鳞疏松竖立，易于脱落，眼球突出，角膜出现血点。
虾类的死亡特征就不是很明显，因为三唑磷对虾类的毒性非常大，虾类的LC50值几乎比鱼类小2个数量级，其特征的症状来不及显现。死亡的判断只能靠三唑磷的定性与定量测定。
2水体、沉积物、生物体中三唑磷的测定方法
死鱼现场有特征的症状，给事故的调查、鉴定提供工作方向，但是还必须在现场的环境调查中用公认、规范的方法取得证据。
2.1样品中三唑磷的提取
2.1.1水体中三唑磷的提取。取500 ml水样于分液漏斗中，加入10 ml二氯甲烷，充分振摇后静置分层，取下层二氯甲烷过无水硫酸钠柱脱水至旋转蒸发瓶中，用10 ml二氯甲烷重复萃取1次，过无水硫酸钠柱后合并萃取液，40 ℃旋转蒸发至近干，加入少量甲苯洗涤旋发瓶，定容至1 ml，供气相色谱分析用。
2.1.2沉积物中三唑磷的提取。取10 g样品于50 ml具塞锥形瓶中，加入10 ml正己烷，磁力搅拌5 min，收集有机相，重复萃取2次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠柱脱水，40 ℃旋转蒸发至近干，加入少量甲苯洗涤旋发瓶，定容至1 ml，供气相色谱分析用。
2.1.3生物体中三唑磷的提取。将样品解冻，称取10 g样品于50 ml离心管中，加入20 ml丙酮，均质机均质1 min，分散均匀， 4 000 r/min离心3 min，将丙酮层转移至100 ml鸡心瓶中。原离心管中加入10 ml丙酮重复提取1次，合并提取液，于35 ℃水浴中减压旋转蒸发至近干。加入30 ml 30 g/L硫酸钠溶液和10 ml正己烷，充分振荡混合1 min，转移至另一50 ml离心管中，4 000 r/min离心3 min，除去上层正己烷层。重复向水相中加入正己烷提取直至正己烷层呈无色。水相倒入125 ml分液漏斗中，加入20 ml二氯甲烷，充分振摇2 min，静置分层。将下层二氯甲烷提取液放入100 ml鸡心瓶中。再向原分液漏斗中加入20 ml二氯甲烷，充分振摇2 min，静置分层。合并下层二氯甲烷提取液，经过无水硫酸钠柱脱水过滤于100 ml鸡心瓶中，于35 ℃水浴中减压旋转蒸发至近干，转移至5 ml刻度试管中并用氮气吹干，加入1 ml甲苯，供气相色谱分析用。 2.2仪器仪器为美国瓦里安公司生产的气相色谱仪，型号为CP3800。
2.3分析条件进样口温度为270 ℃，不分流进样；载气为99.999%高纯氮，流速为2.0 ml/min；毛细管为SUPELCO SPB50，采用程序升温，150 ℃以30 ℃/min升温到250 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升温到260 ℃，保持5 min；检测器为氮磷检测器，温度为300 ℃，尾吹气流量为28.0 ml/min，氢气流量为4.2 ml/min，空气流量为175.0 ml/min，铷珠电流为3.2 A。
3水生物毒性试验
3.1方法标准
参照国家标准GB17378.7-1998海洋监测规范 近海污染生态调查和生物监测，4.1.7 生物毒性试验以及国家标准GB/T13267-91水质物质对淡水鱼类急性毒性测定方法。
3.2试验结果三唑磷对鲈鱼和脊尾白虾的24 hLC50分别为0.089 0、0.080 0 mg/L，48 hLC50分别为0.082 0、0.008 9 mg/L，96 hLC50分别为0.031 0、0.001 0 mg/L（表1）[1-2]。
4案例分析
4.1由于三唑磷引起的养殖塘污染事故鉴定
2005年，浙江舟山某养殖塘养殖的脊尾白虾突然出现死亡，附近有养殖户清塘使用三唑磷。到现场分别采集脊尾白虾死亡塘、进水口、进水渠、施用三唑磷养殖塘水样及死亡的生物样。通过分析，在上述样品中均检出三唑磷，其浓度分别为0.041、0.052、0.067、0.089、0.024 mg/kg，水体中浓度分布基本上呈施用三唑磷养殖塘从水渠由高到低至脊尾白虾死亡养殖塘的趋势，结合三唑磷对脊尾白虾的48 h LC50为0.008 9 mg/L[2]，证明脊尾白虾的死亡与施用三唑磷清塘有关。
4.2由于三唑磷引起的网箱养殖区污染事故鉴定
2005年，温州苍南县某网箱养殖鲈鱼出现死亡，并送来水样和死亡鲈鱼样品，鲈鱼嘴张开，鳃盖外翘，鱼体颜色明显加深，口中出血，与实验室毒性试验死亡鲈鱼特征相似。用气相色谱仪对水体、鱼鳃、肌肉组织进行检测，水体中三唑磷检出浓度为0.011 0 mg/L，鱼鳃中0.025 mg/kg，肌肉组织中未检测出三唑磷含量，三唑磷对鲈鱼的毒性较大，其48 h LC50为0.082 0 mg/L[1]，可判断鲈鱼的死亡与三唑磷有关。
5讨论
三唑磷多用毛细管气相色谱法进行测定[3-5]，运用保留时间定性，外标法定量。不同的仪器对三唑磷的测定有不同的保留时间，通过对气相色谱仪的测定条件进行优化，可以快速地对污染事故中的三唑磷含量进行定性和定量测定。
鱼类三唑磷中毒后鱼嘴张开，鳃盖外翘，是由于三唑磷直接破坏鱼类的鳃部组织使其呼吸困难，鱼类极力张开嘴及扩大鳃部换水量以获得充足氧气所致。上述症状与水体缺氧导致的死鱼相似，但出现该类死鱼事故时如水体中溶解氧正常，则表明鱼体可能是三唑磷中毒死亡。这是鱼类三唑磷中毒后有别于其他有机磷类农药中毒后的特征。
三唑磷中毒特征是小鱼先死，大鱼后死，鱼嘴张开、鳃盖外翘，体色普遍明显加深、口中出血。三唑磷对4种生活在沿岸水域或滩涂鱼类的毒性大小为梭鱼>大弹涂鱼>鲈鱼>日本鳗鲡苗[2]，对长毛对虾的48 h LC50为0.053 0 mg/L，对脊尾白虾为0.008 9 mg/L[3]。
用气相色谱仪对水质、沉积物以及生物体中的三唑磷进行定量定性检测，该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，可以应用于渔业污染事故调查，对确定污染物和污染源起了重大作用，有助于渔业污染事故的调查处理，取得较好的社会和经济效益。
參考文献
[1]
金彩杏，丁跃平，刘士忠，等.三唑磷农药对鲈鱼等鱼类的急性毒性试验[J].水产科技情报，2002，9（4）：156-158.
[2] 丁跃平，金彩杏，郭远明，等.三唑磷对海水虾类、蟹类的急性毒性试验[J].浙江海洋学院学报：自然科学版，2002，21（2）：116-118.
[3] 季玉玲，林国庆.蔬菜中三唑磷残留测试方法研究[J].农药，1997，36（7）：30-31.
[4] 李秀杰，姜敏怡.三唑磷的气相色谱分析[J].农药，1997，36（10）：32-33.
[5] 张水坝，易军，叶江雷，等.气相色谱法测定茶叶中的噻嗪酮、甲胺磷、乙酰甲胺磷及三唑磷残留[J].色谱，2004，22（2）：154-157.
关键词三唑磷；渔业污染事故；气相色谱法
中图分类号S851.34+7文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）23-119-02
Abstract Taking triazophos as an example， based on describing fishery pollution accident caused by triazophos， fish mortality and death sequence， combined with toxicity experiment， using GC method to determine content of triazophos in water and biology is good， which can be used in fishery pollution accident investigation.
Key words Triazophos； Fishery pollution accident； GC
近年來随着海水养殖的不断发展，养殖过程中药物的使用也开始泛滥，养殖户为了保护养殖产品不受敌害生物的侵害并达到最大的经济效益，使用大量的药物清除敌害生物，从而导致养殖生物体内的药物残留增加，也可能殃及其他的养殖生物和天然资源。在浙江沿海滩涂养殖中广泛使用三唑磷就是典型例子。三唑磷对不同种类海洋生物的毒性不同[1-2]，控制一定的三唑磷浓度，可以清除对三唑磷比较敏感的生物，如一些鱼类、虾蟹类，而保留了不敏感的生物，如一些贝类。20世纪80年代后期以来，滩涂贝类幼苗养殖大量使用三唑磷，贝类成活率明显提高；在围塘养殖中也使用三唑磷清塘来提高养殖生物的成活率。目前，三唑磷的使用泛滥，甚至在泥螺起捕时也使用三唑磷以提高采捕效率。然而，被清除的敌害生物是一些敏感鱼类和虾蟹类，是附近张网、插网、串网等不同作业的渔获物，甚至出现在围塘和网箱养殖生物中。因此，海水养殖生物的死亡必然引起不同作业渔民之间的矛盾纠纷，调查、鉴定该类事故原因便成为一项涉及社会稳定的重要工作，具有明显的社会和经济意义。
该类事故一旦发生，与其他渔业污染事故类似，必须在事故现场根据养殖生物死亡与水质特征调查取证，作出初步判断，分析可能的污染原因及主要污染因子，控制污染源，为进一步深入调查赢得主动。回实验室后，通过实验室内的定性、定量分析查找有关的污染物对水生生物的毒性试验资料，在没有相应资料的情况下，应进行相应的污染物对养殖生物的毒性试验以取得理论依据，最后对所获得的资料进行综合分析，得出科学、有说服力的结论。鉴于此，笔者针对调查、鉴定的几起三唑磷引起的污染死鱼事故，介绍了农药引起的渔业污染事故调查方法，以期为渔业污染事故鉴定提供参考。
1鱼类三唑磷中毒特征
鲈鱼三唑磷中毒时，鱼嘴张开，鳃盖外翘，鱼体颜色明显加深，口内出血，该现象在浙江虾峙围塘养殖鲈鱼和苍南网箱养殖鲈鱼的死亡事故中都能观察到。在实验室模拟毒性试验，三唑磷中毒时，鱼类出现烦躁不安、跳跃撞壁、鳃盖鼓起、游动速度减慢，鱼体明显出血直至死亡，试验时不断充气，水体没有缺氧的可能，推测该症状可能是三唑磷毒性表现为接触损害，鳃受损造成呼吸困难。嘴巴张开、鳃盖外翘是三唑磷引起鲈鱼死亡最明显的特征。现场死鱼特征与上述描述相吻合，为死鱼的鉴定提供重要证据。
三唑磷中毒和其他有机磷农药中毒症状有所不同，其他有机磷农药中毒时鱼体腹部肿大，具有程度不同的积水肿腹，并且鱼鳞疏松竖立，易于脱落，眼球突出，角膜出现血点。
虾类的死亡特征就不是很明显，因为三唑磷对虾类的毒性非常大，虾类的LC50值几乎比鱼类小2个数量级，其特征的症状来不及显现。死亡的判断只能靠三唑磷的定性与定量测定。
2水体、沉积物、生物体中三唑磷的测定方法
死鱼现场有特征的症状，给事故的调查、鉴定提供工作方向，但是还必须在现场的环境调查中用公认、规范的方法取得证据。
2.1样品中三唑磷的提取
2.1.1水体中三唑磷的提取。取500 ml水样于分液漏斗中，加入10 ml二氯甲烷，充分振摇后静置分层，取下层二氯甲烷过无水硫酸钠柱脱水至旋转蒸发瓶中，用10 ml二氯甲烷重复萃取1次，过无水硫酸钠柱后合并萃取液，40 ℃旋转蒸发至近干，加入少量甲苯洗涤旋发瓶，定容至1 ml，供气相色谱分析用。
2.1.2沉积物中三唑磷的提取。取10 g样品于50 ml具塞锥形瓶中，加入10 ml正己烷，磁力搅拌5 min，收集有机相，重复萃取2次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠柱脱水，40 ℃旋转蒸发至近干，加入少量甲苯洗涤旋发瓶，定容至1 ml，供气相色谱分析用。
2.1.3生物体中三唑磷的提取。将样品解冻，称取10 g样品于50 ml离心管中，加入20 ml丙酮，均质机均质1 min，分散均匀， 4 000 r/min离心3 min，将丙酮层转移至100 ml鸡心瓶中。原离心管中加入10 ml丙酮重复提取1次，合并提取液，于35 ℃水浴中减压旋转蒸发至近干。加入30 ml 30 g/L硫酸钠溶液和10 ml正己烷，充分振荡混合1 min，转移至另一50 ml离心管中，4 000 r/min离心3 min，除去上层正己烷层。重复向水相中加入正己烷提取直至正己烷层呈无色。水相倒入125 ml分液漏斗中，加入20 ml二氯甲烷，充分振摇2 min，静置分层。将下层二氯甲烷提取液放入100 ml鸡心瓶中。再向原分液漏斗中加入20 ml二氯甲烷，充分振摇2 min，静置分层。合并下层二氯甲烷提取液，经过无水硫酸钠柱脱水过滤于100 ml鸡心瓶中，于35 ℃水浴中减压旋转蒸发至近干，转移至5 ml刻度试管中并用氮气吹干，加入1 ml甲苯，供气相色谱分析用。 2.2仪器仪器为美国瓦里安公司生产的气相色谱仪，型号为CP3800。
2.3分析条件进样口温度为270 ℃，不分流进样；载气为99.999%高纯氮，流速为2.0 ml/min；毛细管为SUPELCO SPB50，采用程序升温，150 ℃以30 ℃/min升温到250 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升温到260 ℃，保持5 min；检测器为氮磷检测器，温度为300 ℃，尾吹气流量为28.0 ml/min，氢气流量为4.2 ml/min，空气流量为175.0 ml/min，铷珠电流为3.2 A。
3水生物毒性试验
3.1方法标准
参照国家标准GB17378.7-1998海洋监测规范 近海污染生态调查和生物监测，4.1.7 生物毒性试验以及国家标准GB/T13267-91水质物质对淡水鱼类急性毒性测定方法。
3.2试验结果三唑磷对鲈鱼和脊尾白虾的24 hLC50分别为0.089 0、0.080 0 mg/L，48 hLC50分别为0.082 0、0.008 9 mg/L，96 hLC50分别为0.031 0、0.001 0 mg/L（表1）[1-2]。
4案例分析
4.1由于三唑磷引起的养殖塘污染事故鉴定
2005年，浙江舟山某养殖塘养殖的脊尾白虾突然出现死亡，附近有养殖户清塘使用三唑磷。到现场分别采集脊尾白虾死亡塘、进水口、进水渠、施用三唑磷养殖塘水样及死亡的生物样。通过分析，在上述样品中均检出三唑磷，其浓度分别为0.041、0.052、0.067、0.089、0.024 mg/kg，水体中浓度分布基本上呈施用三唑磷养殖塘从水渠由高到低至脊尾白虾死亡养殖塘的趋势，结合三唑磷对脊尾白虾的48 h LC50为0.008 9 mg/L[2]，证明脊尾白虾的死亡与施用三唑磷清塘有关。
4.2由于三唑磷引起的网箱养殖区污染事故鉴定
2005年，温州苍南县某网箱养殖鲈鱼出现死亡，并送来水样和死亡鲈鱼样品，鲈鱼嘴张开，鳃盖外翘，鱼体颜色明显加深，口中出血，与实验室毒性试验死亡鲈鱼特征相似。用气相色谱仪对水体、鱼鳃、肌肉组织进行检测，水体中三唑磷检出浓度为0.011 0 mg/L，鱼鳃中0.025 mg/kg，肌肉组织中未检测出三唑磷含量，三唑磷对鲈鱼的毒性较大，其48 h LC50为0.082 0 mg/L[1]，可判断鲈鱼的死亡与三唑磷有关。
5讨论
三唑磷多用毛细管气相色谱法进行测定[3-5]，运用保留时间定性，外标法定量。不同的仪器对三唑磷的测定有不同的保留时间，通过对气相色谱仪的测定条件进行优化，可以快速地对污染事故中的三唑磷含量进行定性和定量测定。
鱼类三唑磷中毒后鱼嘴张开，鳃盖外翘，是由于三唑磷直接破坏鱼类的鳃部组织使其呼吸困难，鱼类极力张开嘴及扩大鳃部换水量以获得充足氧气所致。上述症状与水体缺氧导致的死鱼相似，但出现该类死鱼事故时如水体中溶解氧正常，则表明鱼体可能是三唑磷中毒死亡。这是鱼类三唑磷中毒后有别于其他有机磷类农药中毒后的特征。
三唑磷中毒特征是小鱼先死，大鱼后死，鱼嘴张开、鳃盖外翘，体色普遍明显加深、口中出血。三唑磷对4种生活在沿岸水域或滩涂鱼类的毒性大小为梭鱼>大弹涂鱼>鲈鱼>日本鳗鲡苗[2]，对长毛对虾的48 h LC50为0.053 0 mg/L，对脊尾白虾为0.008 9 mg/L[3]。
用气相色谱仪对水质、沉积物以及生物体中的三唑磷进行定量定性检测，该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，可以应用于渔业污染事故调查，对确定污染物和污染源起了重大作用，有助于渔业污染事故的调查处理，取得较好的社会和经济效益。
參考文献
[1]
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[5] 张水坝，易军，叶江雷，等.气相色谱法测定茶叶中的噻嗪酮、甲胺磷、乙酰甲胺磷及三唑磷残留[J].色谱，2004，22（2）：154-157.