【摘 要】
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目的构建携带神经营养素3(NT-3)和脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组慢病毒载体及探讨其在脊髓损伤中的意义。方法利用PCR方法获取NT-3和BDNF基因,将所得目的基因与慢病毒
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院超声诊断科,西安交通大学第一附属医院骨科,陕西省西安市第四医院（西安交通大学附属广仁医院）超声诊断科
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:81701896);教育部中央高校专项基金(编号:xjj2018jchz03);陕西省自然科学基础研究计划(编号:2018JQ8069)
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目的构建携带神经营养素3(NT-3)和脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组慢病毒载体及探讨其在脊髓损伤中的意义。方法利用PCR方法获取NT-3和BDNF基因,将所得目的基因与慢病毒载体(p+LV-CMV-EF1a-green和pLV-CMV-EF1a-RFP)分别进行双切酶后定向重组和连接,其产物转化细菌感受态细胞后,对阳性克隆进行测序和分析比对。质粒载体构建成功后,利用病毒包装体系,转入293T细胞,获得的重组慢病毒液,采用孔稀释法测定病毒滴度。结果成功获得携带NT-3和BDNF基因的重组慢病毒载体,二者滴度分别为3×10~7 TU/ml和2×10~7 TU/ml。结论成功获得携带NT-3和BDNF基因的重组慢病载体,为后续实验运用重组慢病载体共转染脂肪干细胞奠定基础,进而为治疗脊髓损伤提供给了新思维。
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