疏绵状嗜热丝孢菌糖化酶基因(gla)的克隆及在毕赤酵母中的表达

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本研究以疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)cDNA为模板,克隆了糖化酶基因(gla),序列分析表明gla的开放阅读框由1854个核苷酸组成,编码617个氨基酸。根据氨基酸序列推算该酶的分子量为64kD,属于糖苷水解酶第15家族,具有该家族催化保守区的典型特征。PCR扩增gla的成熟蛋白编码基因,构建表达载体,经线性化后电击转化导入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastorisGS115),并成功进行了表达。重组酶经摇瓶发酵后酶活可达11.6U/mL,经硫酸铵沉淀、DEAE-
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