BMP-2诱导人牙髓细胞分化过程中miRNA表达谱的变化

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目的:筛选出骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导人牙髓细胞(human dental pulp cells,h DPCs)成牙本质向分化时差异表达的微小RNA(miRNAs)。方法:以BMP-2诱导液培养h DPCs 14 d作为诱导组,以未诱导的h DPCs为对照组,实时定量PCR检测成牙本质相关基因:牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达;通过miRNA芯片筛选h DPCs向成牙本质细胞分化过程中差异表达的miRNAs,采用实时定量PCR对结果进行验证;应用生物信息学软件进行靶基因预测,初步推测BMP-2诱导h DPCs分化过程中涉及的通路及功能。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时定量PCR结果显示,各目的基因(DSPP、DMP-1、ALP)在诱导组的表达均高于对照组(P<0.05)。基因芯片结果显示,h DPCs成牙本质向诱导后,差异表达的miRNAs有36个,包括上调20个和下调16个。实时定量PCR对其中5个miRNAs的验证结果与芯片结果基本一致。生物信息学分析显示,基因的功能分布为37.8%与生物过程有关,29%与细胞成分有关,33%与分子功能有关,约有0.2%的基因未检测出具体功能和作用。结论:在h DPCs经BMP-2诱导向成牙本质细胞分化过程中,存在miRNA表达谱变化,为进一步研究差异表达的miRNAs在h DPCs分化过程中的作用及其靶基因的生物学效应奠定了基础。
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