观察微小RNA(miRNA，miR)let-7c对肝癌细胞增殖的影响并验证其靶基因。
方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测人肝癌细胞MHCC-97L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721及人肝细胞L02中let-7c的表达。使用Lipofectamine™2000脂质体将miRNA转染入HCCLM3细胞，设转染let-7c的细胞为let-7c组，转染阴性对照miRNA的细胞为对照组，空白组未进行转染，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测let-7c对细胞增殖的影响，流式细胞术检验各组细胞周期的差异，Western blot检测转染后细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)的蛋白表达情况。将CDK6的3’端非编码区(3’-UTR)连接入pMIR-REPORT荧光素酶载体，建成荧光素酶报告基因。将miRNA、荧光素酶报告基因、海肾荧光素酶质粒共转染入293T细胞，检测转染后荧光素酶的活性，验证let-7c对3’-UTR的结合作用。
结果肝癌细胞MHCC-97L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721中的let-7c表达量均低于L02，表达量分别为(3.22±0.08)×10－4、(2.34±0.11)×10－4、(1.85±0.03)×10－4、(3.03±0.11)×10－4及(4.37±0.09)×10－4(P<0.05)。let-7c组细胞在转染后48、72、96 h的吸光度值均低于对照组及空白组(P<0.05)，而对照组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染后72 h，let-7c组细胞处于G1期的比例为(56.95±2.40)%，均高于另外两组(P<0.05)，而另外两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染后48 h，let-7c组CDK6蛋白的表达量均低于另外两组(P<0.05)，而另外两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因检测发现let-7c与对照miRNA比较，能抑制荧光素酶的活性(P<0.05)。
结论let-7c在肝癌细胞中的表达低于正常肝细胞，let-7c能抑制肝癌细胞的增殖，并使细胞阻滞于G1期，CDK6是其调控的靶基因。