背景:线粒体融合素2蛋白,主要通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B诱导血管平滑肌细胞凋亡。去除穿膜区序列的线粒体融合素2蛋白,相对分子质量减小41%,诱导凋亡作用可能更强。目的:观察比较去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路。设计、时间及地点:基因水平的对比观察实验。于2008-01/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心实验室完成。材料:大鼠血管平滑肌细胞及携带半乳糖甘酶基因、携带线粒体融合素2基因和携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒均由陈光慧教授惠赠。方法:将大鼠血管平滑肌细胞传代培养3～10代后随机分为4组,①空白对照组:不加干预。②携带半乳糖甘酶基因的对照组:感染携带半乳糖甘酶基因的重组腺病毒。③携带线粒体融合素2基因的实验组:感染携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒。④携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的实验组:感染携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒。主要观察指标:①重组腺病毒感染血管平滑肌细胞24h后观察完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因的表达情况。②感染后24,48和72h采用流式细胞术、酶联免疫吸附法观察细胞凋亡情况。③免疫印迹分析病毒感染血管平滑肌细胞24h后磷酸化蛋白激酶B表达变化。结果:①感染后完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均有表达。②去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用显著增强,且呈时间依赖性(P<0.01)。③两个实验组中磷酸化蛋白激酶B水平均明显降低,但去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因实验组更显著(P<0.01)。结论:去除穿膜区序列的线粒体融合素基因2诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用更强,其机制与抑制蛋白激酶B磷酸化有关。