【摘 要】
：
为研究大肠杆菌(E.coli)及脂多糖(LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统在调控细胞外基质(ECM)代谢中的作用,分别以106 CF U/mL热灭活E.coli菌液、7.5μg/mL LPS以及E.coli菌液与LPS混合液作用于体外培养的BMECs,分别在作用细胞6、12、24、48 h后提取细胞总RNA和总蛋白,通过qPCR、Western blot检测MMP-1、M
【机 构】
：
内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特 010018
论文部分内容阅读
为研究大肠杆菌(E.coli)及脂多糖(LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统在调控细胞外基质(ECM)代谢中的作用,分别以106 CF U/mL热灭活E.coli菌液、7.5μg/mL LPS以及E.coli菌液与LPS混合液作用于体外培养的BMECs,分别在作用细胞6、12、24、48 h后提取细胞总RNA和总蛋白,通过qPCR、Western blot检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、uPA、uPAR、PAI-1 mRNA转录水平和相应蛋白表达水平,并通过明胶酶谱试验检测细胞上清液中MMP-2和MMP-9蛋白活性.结果显示:E.coli菌液和LPS作用于BMECs后,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、uPA、uPAR、PAI-1 mRNA转录水平和相应蛋白表达水平均有不同程度上升.MMP-2、TIMP-1、uPA、uPAR、PAI-1 mRNA转录水平在菌液作用后显著上升,MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-2、uPAR mRNA转录水平在菌液与LPS联合作用后显著上升;MMP-9、MMP-13、TIMP-2蛋白表达水平在LPS作用后显著上升;TIMP-1、uPA、uPAR蛋白表达水平在菌液作用后显著上升;MMP-9、MMP-13、uPA、uPAR蛋白表达水平在菌液与LPS联合作用后显著上升.3个作用组MMP-2蛋白活性在不同时间均显著上升;菌液、菌液与LPS联合作用12 h时MMP-9蛋白活性显著上升.结果表明,热灭活E.coli菌液和LPS可诱导BMEC s中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、uPA、uPAR和PAI-1的表达,并激活uPA系统参与调控MMPs的表达.本试验初步探究了大肠杆菌感染奶牛乳腺组织导致乳腺纤维化的发病机理,为奶牛乳腺炎和乳腺纤维化药物研究提供了依据.
其他文献
2020年4月,A市农业农村局接群众举报,某宠物商店涉嫌未取得动物诊疗许可证从事动物诊疗活动.经立案调查,认定当事人违法事实存在,证据确凿.根据《中华人民共和国动物防疫法》之规定,责令当事人停止动物诊疗活动,依法给予了“没收违法所得人民币5420元,并处罚款人民币6000元”的行政处罚.本文对该案的基本案情、法律适用及处罚内容进行了分析,并探讨了行政违法行为的“连续状态”追究时效,建立执法全过程记录制度等问题,以期为行政执法人员办理此类案件提供借鉴.
我国土壤盐渍化问题日趋严重,在耕地红线内的盐碱地约有9.3×106 hm2,盐胁迫是制约粮食生产的主要非生物胁迫因子之一.水稻是盐碱地改良的先锋作物,全面深入了解水稻对盐胁迫的响应,对盐碱地水稻生产具有重要意义.本文概述了盐胁迫对水稻生长发育、产量和品质形成的影响;从渗透调节、离子平衡等生理层面以及基因层面阐述盐胁迫影响水稻生长发育的生理机制;总结了减轻水稻盐胁迫的调控措施;对今后深入开展水稻盐逆境的研究进行展望并提出建议.
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)给全球养殖业造成了巨大的威胁和挑战.非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)具有比寻常病毒更加巨大的基因组、迅速的变异能力和更加复杂多变的免疫逃逸机制,目前市场上仍无有效预防疫苗.科研人员几十年来,从灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗及病毒载体疫苗等不同方向致力于ASF疫苗研发.ASFV灭活疫苗相对安全,但是提供的保护力偏低;DNA疫苗还无法解决虽能诱导产生细胞和体液免疫应答,但是对生猪不能起到免疫保护
为降低甘薯秧回收机功耗,提高甘薯秧回收率,利用CFX软件求解计算抛送装置内气固两相流,仿真对比分析不固输送弯管结构时抛送装置内两相流分布规律,以确定输送管合理结构参数.仿真结果表明:输送弯管的上壁面三段弧度结合方案、单一曲率半径收缩过渡、适当的风机入口开度有助于提高抛送装置性能.以弯管弧度、收缩曲线曲率半径、入口开度为试验因素,以回收机抛送装置比功耗、甘薯秧回收率为响应值进行三因素三水平中心组合仿真优化试验并进行试验验证.结果 表明:输送弯管上壁面弧度采用三段弧组合R1026 mm+R513 mm+R25
为验证一种新的CRISPR分型方法——CSST分型方法分型沙门氏菌的可行性,分别采用传统CRISPR与CSST两种分型方法,对20株临床肠道沙门氏菌分离株进行分型.结果显示:CSST分型方法同传统CRISPR分型方法分型沙门氏菌的结果完全一致,均将20株临床肠道沙门氏菌菌株分成了15种亚型,其中CR4/CT4和CR9/CT9为最优势CR/CT型,而其他CR/CT型均呈零星分布.结果表明,CSST分型方法可用于肠道沙门氏菌分型,且比传统CRISPR分型方法更简洁、方便.本研究为沙门氏菌的流行病学溯源提供了重
为建立检测猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的间接ELISA方法,分析了PRRSV结构蛋白GP5和M的二级结构抗原指数、抗原性、亲水性、表面可及性以及潜在中和表位等参数,选取GP5的47～61、143～156和186～199位氨基酸,M蛋白的63～70、133～146和156～169位氨基酸作为免疫原,构建带接头序列的GP5/M中和表位融合表达质粒;通过优化大肠杆菌表达和蛋白纯化条件,免疫印迹鉴定GP5/M特异抗原,获得了可溶性的GP5/M中和表位融合蛋白.基于纯化的GP5/M中和表位融
为了解山东省家禽养殖场的生物安全水平,以问卷调查方式,对养殖场基本信息、场内区域划分、免疫接种、引种购进、消毒、饲养管理等问题展开调查.经预调查后,2021年6—7月在全省范围内开展本次调查.在全省16个地级市,采用随机抽样方式,每地级市抽检1～2个县(市、区);应用配额采样方式,在县市域内选取蛋鸡养殖场、肉鸡养殖场以及种禽场各1家.共收到有效问卷141份,分别来自12个地级市36个县(市、区),其中来自蛋鸡养殖场、肉鸡养殖场和种禽场占比分别为63.83％、26.95％和9.22％.所调查养殖场中,按照管
配重法能降低五杆式丹参移栽机构的振动,改善其动力学性能.为获取所添加配重的最优参数,建立五杆式丹参移栽机构的动力学模型,在动力学模型的基础上建立移栽机构的动力学优化模型,运用多目标函数获取机构不同转速下所添加配重的优化参数,通过动力学分析,确定曲柄转速为60 r/min时所对应的配重参数为最优参数组合:曲柄AB添加配重半径r2为116 mm、圆心角α2为155°、厚度d2为21.0 mm,曲柄OD添加配重半径r5为139 mm、圆心角α5为158°、厚度d5为25.8 mm.根据所得的配重参数研制样机,并
针对现有加热板控制系统存在的不能连续改变加热速率、温度上冲量大和人机交互感差等问题,研发一套基于PID调节的可连续改变加热速率的加热板控制系统.该系统基于PID调节控制加热板以恒定的速率或连续改变的速率加热,实时监控保温温度和保温时间,调整温度上冲量,以及保存数据.控制系统中上位机软件以Visual Basic 6.0语言作为开发工具,主要功能模块包括菜单栏、串口通信、温度显示、参数设置、参数显示和提醒.程序设计包括传感器校准、加热速率、保温温度、数据保存和预处理等子程序.试验分别选取牛奶、土豆泥和核桃外
恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)是一种简便、快速及可使用于现场检测的荧光PCR方法.本研究采用农业农村部推荐的检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸的荧光定量PCR方法的引物和探针,通过对引物、探针、Taq酶等反应体系的优化,建立了基于恒温隔绝式荧光PCR的ASFV检测方法.所建立的方法可特异性检出ASFV核酸,对猪常感染的其他6种病毒核酸进行检测,结果均为阴性;检测下限为2.55 copies/μL,组内和组间变异系数均<2％.100份临床样本的检测结果均