【摘 要】
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目的:获得具有抗凝活性的重组线虫抗凝肽(NAP)蛋白,为新型抗凝药物的开发奠定基础.方法:将pPIC3.5K-rNAP质粒转化毕赤酵母菌株GS115,筛选出阳性菌株后,用甲醇诱导表达.收集酵
【基金项目】
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山东省科学技术发展计划重大项目资助;
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目的:获得具有抗凝活性的重组线虫抗凝肽(NAP)蛋白,为新型抗凝药物的开发奠定基础.方法:将pPIC3.5K-rNAP质粒转化毕赤酵母菌株GS115,筛选出阳性菌株后,用甲醇诱导表达.收集酵母培养上清,用SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,通过测定PT(血浆凝血酶原时间)、INR(血浆凝血酶原国际标准化比率)和APTT(活化部分凝血活酶时间)来验证其生物学活性.结果:获得了稳定表达NAP的重组酵母菌株.重组NAP被分泌表达,其分子量比预计分子量(8.7kDa)稍大,约为10kDa左右,可能与糖基化有关.体外活性检测证实其有较强的抗凝活性.结论:在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的重组线虫抗凝肽,可用于新型抗凝药物的开发.
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