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目的
探讨利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155（miR-155）基因敲除小鼠模型。
方法选择健康C57BL/6J小鼠，首先进行小鼠基因组靶序列的扩增和测序，明确miR-155序列及位点，然后设计并构建Cas9载体质粒（Cas9 RNA）及打靶载体单导向RNA（sgRNA），随后将体外转录的Cas9 RNA及sgRNA显微注射入小鼠的受精卵，并将受精卵体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中，待小鼠生育后得到F0代小鼠。通过对F0代小鼠基因型检测确定基因敲除情况，进而繁育并建立基因敲除小鼠模型。
结果利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠18只，其中4号小鼠出现DNA单链碱基片段缺失，且基因型可以稳定传代。对其进行繁育后，得到F1代杂合子小鼠3只。杂合子小鼠交配繁育，得到F2代纯合子基因敲除小鼠，电泳及测序结果证实其缺失114 bp碱基序列，成功敲除miR-155基因。miR-155基因敲除小鼠在清洁级动物饲养环境中可以正常繁育。
结论CRISPR/Cas9技术能够快速、有效地构建miR-155基因敲除小鼠模型。