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摘要：目的探究干热烘制和湿热蒸煮制对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响。方法 采用直接烘干、蒸制和煮制后烘干对珠子参进行炮制加工，以HPLC测定不同炮制品中竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果相比直接烘干，蒸制和煮制烘干的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量有降低。结论直接干燥对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量影响不大，该方法适合珠子参药材的加工炮制。
关键词：珠子参；炮制方法；竹节参皂苷Ⅳa
中图分类号：R283.1
文献标志码：A
文章编号：1007-2349（2015）04-0066-03
珠子参又名珠儿参，扣子七，钮子七。为五加科植物珠子参[ Pan，ax japonicus C.A.Mey.var. major（ Burk.）C.Y.Wu etK.M.Feng]或羽叶三七[Pan，ax japonicus C.A.Mey.var.bipin-natifidus（ Seem.）C.Y.Wu et K.M.Feng]的干燥根茎。主产于云南、四川、贵州、陕西、西藏等西部山区。具有补肺、养阴、活络、止血等功效。用于阴气两虚、烦热口渴、虚劳咳嗽、跌扑损伤、关节痹痛、咳血、吐血、崩漏、外伤出血等症状[1-2]。现代研究表明，珠子参主要化学成分为皂苷、多糖、氨基酸和多种微量元素[3-5]，其主要成分皂苷以齐墩果烷型三萜皂苷为主，具有镇痛、镇静[6]、抗炎[7]、提高机体细胞免疫功能[8]抗肿瘤[9]等活性。2010年版中国药典中记载珠子参秋季采挖，直接干燥或蒸（煮）透后干燥可用，但民间药农多采用直接晒干后销售使用。为了客观的评价珠子参药材的质量，本实验采用低温烘干和煮制、蒸制后烘干等加工方法炮制珠子参，研究不同加工炮制对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响，为珠子参质量控制提供依据。1 仪器与试药1.1 仪器及试液 Agilent 1100高效液相色谱仪；SK-3200LH型超声清洗仪（180W，59kHz）；AG285分析天平（梅特勒，瑞士）；乙腈（色谱纯，默克公司）；其余为分析纯；水为云南省药物研究所自制超纯水。1.2试药 竹节参皂苷Ⅳa对照品（购于中检所，批号：111861 - 201001）。药材来自丽江珠子参基地。经云南省药物所究所天然药物资源研究中心高丽正高级工程师鉴定为五加科植物人参属珠子参Panax japonicus C，A.Mey.var.major（ Burk）C.Y.Wu et K.M.Feng。2方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱Waters XTerral C18，0.46×250 mm，5μm；流动相乙腈-0. 2%磷酸（37：63）；检测波长203 nm；流速1.0 mL.min-1；进样量20μL；理论塔板数以竹节参皂苷Ⅳa峰计算不低于3000。竹节参皂苷Ⅳa对照品HPLC图见图l。2.2对照品溶液的制备精密称取竹节参皂苷Ⅳa对照品适量，加60%乙醇溶液配制成1.198 mg.mL-l的贮备液，待用。精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取药材粉末（过2号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，称定重量。超声处理40 min，取出放冷，再称定重量，加60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。2.4线性关系的考察分别精密吸取上述贮备液0.5，1，2，3，4，5mL，于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，配制成0. 0599 ，0. 1198 ，0. 2396，0.3594，0.4792，0.5990 mg·mL-l的系列溶液，分别进样20μ L，测定峰面积，以竹节参皂苷Ⅳa对照品的进样量（μg）为横坐标，计算的回归方程：Y=362. 28385X+9.03649（R=0.99998），线性范围：1.198～11. 980μg，见图2。2.5精密度试验 取同一供试品溶液，照2.1项下色谱条件，连续进样6次测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积。计算得RSD0. 71%，结果表明本法精密度良好。2.6稳定性试验取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、18、24 h内进样，照2.1项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积。计算得RSD l.43%，结果表明样品在24 h内峰面积稳定。 2.7重复性试验精密称取同一批号的样品6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积。计算得RSD l.47%，结果表明本法具有良好的重复性。2.8加样回收率分别精密称取已测定含量的样品6份（每份约0.5 g），精密加入竹节参皂苷Ⅳa对照品适量，按2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa含量，测得平均加样回收率为102. 50%，RSD l.17%。3炮制品的制备
直接烘干珠子参三个不同地下部位，分别为大珠（直径约为5～6 cm）、中珠（直径约为2.5～3.5 cm）、小珠（直径约1.5 cm），各自取新鲜药材300 g置于40qC的烘箱中烘干，即得。
煮制烘干珠子参三个不同地下部位，分别为大珠、中珠和小珠，各自取新鲜药材300 g三份，分别在沸水中煮沸5 min、10 min和15 min，滤去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。蒸制烘干珠子参三个不同地下部位，分别为大珠.中珠和小珠，各自取新鲜药材300 g三份，分别在蒸笼中蒸制5 min、10 min和15 min，滤去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。4样品含量测定
分别称取不同加丁炮制的珠子参药材粉末0.1 g，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，按2.1项下色谱条件进行测定，结果见表1。5讨论不同加工炮制方法对珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量有较明显影响，从表1中结果可见，珠子参珠子越大，竹节参皂苷Ⅳa的含量越高；相比较直接烘干，煮制和蒸制后药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量都有不同程度下降，而且随着煮制和蒸制时间的延长，珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量也有逐渐下降的趋势。分析其主要原因可能是由于竹节参皂苷Ⅳa为热敏感性成分，不耐高温，在高温下其成分结构有一定的破坏，因而含量降低。总之，不同炮制方法对珠子参化学成份的影响很大，为了提高有效药物含量，选择正确的炮制方法，研究其炮制前后化学成份变化、作用机制和原理是十分必要的。参考文献：[1]国家药典委员会中华人民共和国药典[S]一部.北京：中国医药科技出版社，2010：254.[2]赵仁，赵毅，等，珠子参研究进展[J].中国现代中药，2008，10（7）：3-6.[3]王答祺，樊娟，李淑蓉，等羽叶三七根茎的三萜皂苷成分及其化学分类意义[J].云南植物研究，1988，10（1）：101[4]池群，郭建文.珠子参的微量元素分析比较[J].西北药学杂志，1993，8（2）：61.[5]宋小妹，李林，杨光明，等不同产地珠子参竹节参皂苷Ⅳa含量测定[J].中国中药杂志，2010，35（7）885-887.[6]李巧云，赵恒，岳松健，等.大叶珠子参总皂苷的镇静镇痛作用研究[J].华西药学杂志，1993，8（2）：90.[7]贺海波，石孟琼，陈涛，等，珠子参水提物抗炎镇痛作用的实验研究[J].第三军医大学报，2010，32（ 20）：2224-2227.[8]陈涛，陈茂华，胡月琴，等.珠子参多糖抗肝癌作用的实验研究[J].时珍国医国药，2010，21（6）：1329-1331[9]陈涛，陈茂华，胡月琴，珠子参多糖提取及抗癌活性研究[J].中国中药杂志，2010，35（7）：912-914.（收稿日期：2014-10-10）
关键词：珠子参；炮制方法；竹节参皂苷Ⅳa
中图分类号：R283.1
文献标志码：A
文章编号：1007-2349（2015）04-0066-03
珠子参又名珠儿参，扣子七，钮子七。为五加科植物珠子参[ Pan，ax japonicus C.A.Mey.var. major（ Burk.）C.Y.Wu etK.M.Feng]或羽叶三七[Pan，ax japonicus C.A.Mey.var.bipin-natifidus（ Seem.）C.Y.Wu et K.M.Feng]的干燥根茎。主产于云南、四川、贵州、陕西、西藏等西部山区。具有补肺、养阴、活络、止血等功效。用于阴气两虚、烦热口渴、虚劳咳嗽、跌扑损伤、关节痹痛、咳血、吐血、崩漏、外伤出血等症状[1-2]。现代研究表明，珠子参主要化学成分为皂苷、多糖、氨基酸和多种微量元素[3-5]，其主要成分皂苷以齐墩果烷型三萜皂苷为主，具有镇痛、镇静[6]、抗炎[7]、提高机体细胞免疫功能[8]抗肿瘤[9]等活性。2010年版中国药典中记载珠子参秋季采挖，直接干燥或蒸（煮）透后干燥可用，但民间药农多采用直接晒干后销售使用。为了客观的评价珠子参药材的质量，本实验采用低温烘干和煮制、蒸制后烘干等加工方法炮制珠子参，研究不同加工炮制对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响，为珠子参质量控制提供依据。1 仪器与试药1.1 仪器及试液 Agilent 1100高效液相色谱仪；SK-3200LH型超声清洗仪（180W，59kHz）；AG285分析天平（梅特勒，瑞士）；乙腈（色谱纯，默克公司）；其余为分析纯；水为云南省药物研究所自制超纯水。1.2试药 竹节参皂苷Ⅳa对照品（购于中检所，批号：111861 - 201001）。药材来自丽江珠子参基地。经云南省药物所究所天然药物资源研究中心高丽正高级工程师鉴定为五加科植物人参属珠子参Panax japonicus C，A.Mey.var.major（ Burk）C.Y.Wu et K.M.Feng。2方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱Waters XTerral C18，0.46×250 mm，5μm；流动相乙腈-0. 2%磷酸（37：63）；检测波长203 nm；流速1.0 mL.min-1；进样量20μL；理论塔板数以竹节参皂苷Ⅳa峰计算不低于3000。竹节参皂苷Ⅳa对照品HPLC图见图l。2.2对照品溶液的制备精密称取竹节参皂苷Ⅳa对照品适量，加60%乙醇溶液配制成1.198 mg.mL-l的贮备液，待用。精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取药材粉末（过2号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，称定重量。超声处理40 min，取出放冷，再称定重量，加60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。2.4线性关系的考察分别精密吸取上述贮备液0.5，1，2，3，4，5mL，于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，配制成0. 0599 ，0. 1198 ，0. 2396，0.3594，0.4792，0.5990 mg·mL-l的系列溶液，分别进样20μ L，测定峰面积，以竹节参皂苷Ⅳa对照品的进样量（μg）为横坐标，计算的回归方程：Y=362. 28385X+9.03649（R=0.99998），线性范围：1.198～11. 980μg，见图2。2.5精密度试验 取同一供试品溶液，照2.1项下色谱条件，连续进样6次测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积。计算得RSD0. 71%，结果表明本法精密度良好。2.6稳定性试验取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、18、24 h内进样，照2.1项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积。计算得RSD l.43%，结果表明样品在24 h内峰面积稳定。 2.7重复性试验精密称取同一批号的样品6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积。计算得RSD l.47%，结果表明本法具有良好的重复性。2.8加样回收率分别精密称取已测定含量的样品6份（每份约0.5 g），精密加入竹节参皂苷Ⅳa对照品适量，按2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa含量，测得平均加样回收率为102. 50%，RSD l.17%。3炮制品的制备
直接烘干珠子参三个不同地下部位，分别为大珠（直径约为5～6 cm）、中珠（直径约为2.5～3.5 cm）、小珠（直径约1.5 cm），各自取新鲜药材300 g置于40qC的烘箱中烘干，即得。
煮制烘干珠子参三个不同地下部位，分别为大珠、中珠和小珠，各自取新鲜药材300 g三份，分别在沸水中煮沸5 min、10 min和15 min，滤去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。蒸制烘干珠子参三个不同地下部位，分别为大珠.中珠和小珠，各自取新鲜药材300 g三份，分别在蒸笼中蒸制5 min、10 min和15 min，滤去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。4样品含量测定
分别称取不同加丁炮制的珠子参药材粉末0.1 g，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，按2.1项下色谱条件进行测定，结果见表1。5讨论不同加工炮制方法对珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量有较明显影响，从表1中结果可见，珠子参珠子越大，竹节参皂苷Ⅳa的含量越高；相比较直接烘干，煮制和蒸制后药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量都有不同程度下降，而且随着煮制和蒸制时间的延长，珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量也有逐渐下降的趋势。分析其主要原因可能是由于竹节参皂苷Ⅳa为热敏感性成分，不耐高温，在高温下其成分结构有一定的破坏，因而含量降低。总之，不同炮制方法对珠子参化学成份的影响很大，为了提高有效药物含量，选择正确的炮制方法，研究其炮制前后化学成份变化、作用机制和原理是十分必要的。参考文献：[1]国家药典委员会中华人民共和国药典[S]一部.北京：中国医药科技出版社，2010：254.[2]赵仁，赵毅，等，珠子参研究进展[J].中国现代中药，2008，10（7）：3-6.[3]王答祺，樊娟，李淑蓉，等羽叶三七根茎的三萜皂苷成分及其化学分类意义[J].云南植物研究，1988，10（1）：101[4]池群，郭建文.珠子参的微量元素分析比较[J].西北药学杂志，1993，8（2）：61.[5]宋小妹，李林，杨光明，等不同产地珠子参竹节参皂苷Ⅳa含量测定[J].中国中药杂志，2010，35（7）885-887.[6]李巧云，赵恒，岳松健，等.大叶珠子参总皂苷的镇静镇痛作用研究[J].华西药学杂志，1993，8（2）：90.[7]贺海波，石孟琼，陈涛，等，珠子参水提物抗炎镇痛作用的实验研究[J].第三军医大学报，2010，32（ 20）：2224-2227.[8]陈涛，陈茂华，胡月琴，等.珠子参多糖抗肝癌作用的实验研究[J].时珍国医国药，2010，21（6）：1329-1331[9]陈涛，陈茂华，胡月琴，珠子参多糖提取及抗癌活性研究[J].中国中药杂志，2010，35（7）：912-914.（收稿日期：2014-10-10）