研究我国临床肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对黏菌素的耐药机制。
方法回顾性收集2011至2014年我国11个城市15家教学医院中非重复的964株肺炎克雷伯菌和1 389株大肠埃希菌。采用琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性。PCR和基因测序检测黏菌素MIC>2 mg/L的菌株mcr-1基因携带率和黏菌素耐药相关基因mgrB、pmrB、phoQ是否存在基因突变。采用实时荧光定量PCR方法比较肺炎克雷伯菌黏菌素耐药组(黏菌素MIC值>2 mg/L，n＝6)和黏菌素敏感组(黏菌素MIC值≤2 mg/L，n＝8)二元调控基因pmrB、pmrC、pmrD、pmrK和pmrE的相对表达量；采用RT-qPCR比较大肠埃希菌黏菌素耐药组(n＝23)和敏感组(n＝24)pmrA、pmrB、pmrC、phoP和phoQ基因的相对表达量。采用接合试验检测携带mcr-1质粒的可转移性。采用SPSS16.0软件进行统计分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。
结果肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌对黏菌素耐药率分别为0.62%(6/964)和1.66%(23/1 389)。黏菌素耐药的2种菌中，mgrB基因均无突变；6株黏菌素耐药肺炎克雷伯菌phoQ基因均无突变，5株pmrB基因发生点突变。黏菌素耐药大肠埃希菌pmrB和phoQ基因均发生1～4个氨基酸位点突变。肺炎克雷伯菌耐药pmrB、pmrC、pmrD、pmrK和pmrE基因的相对表达量较敏感组差异无统计学意义。耐药组与敏感组：pmrB基因的相对表达量分别为(1.04±1.12)与(0.94±0.67)，P＝0.945；pmrC基因分别为(1.39±2.01)与(0.16±0.27)，P＝0.101；pmrD基因分别为(1.59±2.43)与(0.88±0.34)，P＝0.445；pmrK基因分别为(0.64±0.62)与(0.04±0.10)，P＝0.051；pmrE基因分别为(3 492 833 388.83±8 478 977 986.85)与(20 771 428.93±38 000 732.85)，P＝0.445。而大肠埃希菌耐药组pmrB基因的平均相对表达量较敏感组上升9.5倍。黏菌素耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中，mcr-1携带率分别为100%(23/23)、4/6。接合试验表明携带mcr-1的质粒可水平转移至受体菌，并使黏菌素MIC值升高21倍，接合效率为5.78×10-6。
结论携带可通过质粒水平转移的mcr-1基因是肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对黏菌素耐药的主要原因，其他机制如pmrB基因的表达上调也可能参与黏菌素耐药机制的形成。(中华检验医学杂志，2016, 39：618-624)