重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定

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目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1^TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad—LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X—gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×10^9PFU/ml。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的H
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