【摘 要】
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利用PCR技术从布鲁氏菌S2疫苗株中扩增获得外膜蛋白(OMP) 31基因,构建了原核表达质粒pGEX-6P-1-OMP31,并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达,应用Western blot方法鉴定表达产物
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室,河北农业大学动物医学院
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利用PCR技术从布鲁氏菌S2疫苗株中扩增获得外膜蛋白(OMP) 31基因,构建了原核表达质粒pGEX-6P-1-OMP31,并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达,应用Western blot方法鉴定表达产物,并以纯化的OMP31重组蛋白为诊断用抗原,通过反应条件优化,初步建立布鲁氏菌抗体ELISA检测方法.以羊布鲁氏菌病普查检测血清120份为样本,与试管凝集试验进行比较分析.结果:成功构建了pGEX-6P-1-OMP31原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白分子质量约为52 ku,优化试验确定抗原的最佳包被浓度为3 μg/mL,血清最佳稀释度为1:20.试管凝集试验血清样本的阳性率为83％,采用OMP31作为包被抗原的阳性检出率为79％,二者的符合率为95％.研究表明,OMP31作为间接ELISA包被抗原用于羊布鲁氏菌病血清学检测具有良好的反应性和特异性.
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