【摘 要】
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目的 观察石蒜碱抑制乙型肝炎病毒(HBV)诱发肝纤维化的机制.方法 50只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只:正常对照组、模型组、石蒜碱低、高剂量组(50、100 mg/kg)、阳性对照组(秋水仙碱0.12 mg/kg).除了正常对照组,其余各组采用HBV诱发建立肝纤维化动物模型,治疗组小鼠腹腔注射给药,正常对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,持续8周.并采用细胞间非接触式共培养体系培养HSC-T6,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)
【机 构】
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漯河医学高等专科学校,河南漯河462002
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目的 观察石蒜碱抑制乙型肝炎病毒(HBV)诱发肝纤维化的机制.方法 50只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只:正常对照组、模型组、石蒜碱低、高剂量组(50、100 mg/kg)、阳性对照组(秋水仙碱0.12 mg/kg).除了正常对照组,其余各组采用HBV诱发建立肝纤维化动物模型,治疗组小鼠腹腔注射给药,正常对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,持续8周.并采用细胞间非接触式共培养体系培养HSC-T6,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、转化生长因子-β(TGF-β1)mRNA水平,蛋白免疫印迹(western blot)检测细胞纤维化、自噬、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路相关蛋白表达水平,运用PI3K-siRNA、自噬抑制剂(3-MA)探讨石蒜碱通过自噬对肝纤维化的影响.结果 体内实验显示,石蒜碱能减少肝小叶胶原纤维,降低小鼠体内谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、羟脯氨酸、α-SMA、collagen Ⅰ、TGF-β 1 水平,下调 p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K 水平(t=20.937,P=0.001;t=23.505,P=0.001;t=15.778,P=0.007;t=26.279,P=0.001).增加 Beclin-1、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ 水平(t=8.050,P=0.008;t=12.593,P=0.003;t=5.095,P=0.008;t=7.202,P=0.004).体外实验显示,0.313～20 μmol/L的石蒜碱对HSC-T6细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05);与对照组相比,2.5、10 μmol/L 石蒜碱能降低 α-SMA、collagen Ⅰ、TGF-β1,下调 p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K水平(t=8.229,P=0.001;t=11.325,P=0.003),增加 LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ 水平(t=3.798,P=0.019;t=5.735,P=0.005);与石蒜碱组比较,石蒜碱+PI3K-siRNA 组 collagen Ⅰ、p-PI3K/PI3K 水平降低(t=6.877,P=0.004;t=7.206,P=0.002),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 水平增加(t=4.461,P=0.011),而石蒜碱+3-MA 组 collagen Ⅰ、p-PI3K/PI3K 水平上调(t=4.073,P=0.015;t=3.105,P=0.036),LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ 水平下调(t=3.454,PP=0.026).结论 石蒜碱能促进肝细胞自噬,下调细胞纤维化水平,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关.
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