【摘 要】
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目的检测胰腺癌组织及BxPC3细胞的miR-34a表达，明确其靶基因，分析miR-34a及其靶基因的表达与胰腺癌临床病理参数的关系以及对BxPC3细胞增殖和转移能力的影响。方法通过c-MET-3′UTR双荧光素酶报告载体分别克隆c-MET野生型及突变型的3′-UTR，以验证c-MET是miR-34a的靶基因。采用脂质体方法建立过表达miR-34a(miR-34a组)及抑制c-MET表达(c-MET
【机 构】
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200433 上海，海军军医大学附属长海医院普外三科,200433 上海，海军军医大学附属长海医院普外三科,200433 上海，海军军医大学附属长海医院普外三科,200433 上海，海军军医大学附属长
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目的检测胰腺癌组织及BxPC3细胞的miR-34a表达，明确其靶基因，分析miR-34a及其靶基因的表达与胰腺癌临床病理参数的关系以及对BxPC3细胞增殖和转移能力的影响。
方法通过c-MET-3′UTR双荧光素酶报告载体分别克隆c-MET野生型及突变型的3′-UTR，以验证c-MET是miR-34a的靶基因。采用脂质体方法建立过表达miR-34a(miR-34a组)及抑制c-MET表达(c-METsi组)的BxPC3细胞，采用荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法分别检测miR-34a、c-MET mRNA及蛋白表达。应用CCK-8法及Transwell小室实验检测各组BxPC3细胞增殖及转移能力的变化。
结果miR-34a组细胞c-MET野生型的3′-UTR荧光素酶活性较对照组显著下调[(65.00±4.04)%比100%，P＝0.00131)]，而c-MET突变型两组间差异无统计学意义，证实c-MET是miR-34a的靶基因。胰腺癌组织miR-34a表达较癌旁正常组织平均下调1.92倍，差异有统计学意义(P＝0.003)。与对照组比较，miR-34a组细胞c-MET mRNA及蛋白表达显著下降(0.045±0.003比0.085±0.001、0.400±0.058比1.133±0.120)。培养4 d后，miR-34a组和c-METsi组细胞增殖活力较对照组显著下降(P值分别为0.0012、0.0001)；穿膜细胞数显著减少(231±12比351±16，P＝0.0039；259±7比351±16，P＝0.0066)，差异均有统计学意义。胰腺癌组织miR-34a高表达、c-MET阳性表达与TNM分期、肿瘤分化程度相关，而与其他临床病理参数无显著相关性，且miR-34a表达与c-MET表达呈负相关(P<0.001)。
结论miR-34a在胰腺癌组织中低表达，其抑癌活性部分可能通过抑制c-MET表达得以实现；过表达miR-34a或抑制c-MET表达有望成为胰腺癌新的诊治靶点。
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