【摘 要】
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目的 观察磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4,PDE4)4种亚型(A、B、C和D)的siRNA对内毒素刺激前后小胶质细胞内cAMP的影响.方法 24孔板接种原代培养的小胶质细胞,收集细胞测定P
【机 构】
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南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院麻醉科,江苏,南京,210000
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目的 观察磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4,PDE4)4种亚型(A、B、C和D)的siRNA对内毒素刺激前后小胶质细胞内cAMP的影响.方法 24孔板接种原代培养的小胶质细胞,收集细胞测定PDE4 4种亚型的蛋白含量.随机将细胞分为空白对照组、LPS组、单纯载体组、错配siRNA 组、PDE4A-siRNA组、PDE4B-siRNA组、PDE4C-siRNA组和PDE4D-siRNA组,空白对照组与LPS组细胞不进行转染;其余5组分别转染LipofectaminTM RNAiMAX、错配siRNA、PDE4A siRNA、PDE4B siRNA、PDE4C siRNA和PDE4D siRNA,48 h后收集各组细胞测定4种亚型mRNA及细胞内cAMP的表达水平;除空白对照组外,其余7组细胞在转染48 h后分别给予100 μg·L-1 LPS,刺激30 min后收集各组细胞测定细胞内cAMP的浓度.结果 PDE4 4种亚型蛋白均在小胶质细胞内表达;转染48 h后,PDE4A-siRNA、PDE4B-siRNA、PDE4C-siRNA和PDE4D-siRNA可分别明显抑制相应PDE4亚型mRNA 的表达(P<0.05),各组细胞内cAMP的含量无明显改变(P＞0.05);LPS 刺激后各组细胞内cAMP的含量均比空白对照组明显增高(P<0.05),与LPS组相比,仅PDE4B-siRNA组细胞内的cAMP含量明显升高(P<0.05).结论 PDE4B-siRNA可有效抑制PDE4B mRNA的表达并能明显升高LPS刺激后细胞内的cAMP含量.
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