【摘 要】
：
目的 构建携带人sTNFR1与IgGFc片段融合基因的重组腺病毒,稳定表达并初步鉴定其功能活性在妊娠哮喘炎症机制中的作用.方法 将PCR扩增的sTNFR1及IgGFc基因片段先后连接到穿梭
【机 构】
：
第四军医大学西京医院妇产科,Department of Allergy-immunology
论文部分内容阅读
目的 构建携带人sTNFR1与IgGFc片段融合基因的重组腺病毒,稳定表达并初步鉴定其功能活性在妊娠哮喘炎症机制中的作用.方法 将PCR扩增的sTNFR1及IgGFc基因片段先后连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV多克隆位点上,酶切线性化后在BJ5183细菌内与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,产生获得的AdE-EGFP-sTNFR1-Ig以脂质体法转染AD293细胞进行病毒包装,以绿色荧光蛋白(GFP)监测病毒滴度及感染效率.RT-PCR、Western blot实验鉴定细胞内重组腺病毒转录及融合基因与蛋白表达;流式细胞术、ELISA实验分析混合培养上清中转染肥大细胞(MC)激活、调节同基因来源T细胞表达Th2/Treg水平及细胞因子分泌效果;MTT评估转染细胞上清中sTNFR1-Ig对TNF-α介导细胞毒效应的拮抗作用.结果 成功构建编码sTNFR1-Ig基因的重组腺病毒载体经酶切和测序鉴定正确,制备的腺病毒在转染细胞中的GFP表达以及CPE效应明显,扩增后的滴度为3.7×1010～4.8×1010 pfu/ml,体外感染效率可达90%以上;sTNFR1-Ig基因在 mRNA 及蛋白水平获得的清晰条带均证实腺病毒包装与扩增成功.表达sTNFR1-Ig的MC诱导T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平以及IL-12含量均明显升高,CD4+IL-4+Th2细胞水平下调(P＜0.05),Th2/Treg所占CD4+T细胞比值下降(P＜0.05).sTNFR1-Ig封闭TNF-α对MC免疫毒性作用的浓度效应明显,而EGFP-MCs与对照细胞上清对TNF-α毒性效应的中和阻断能力不足(P＜0.05).结论 携sTNFR1-Ig基因重组腺病毒参与的免疫调控与妊娠期哮喘发生发展密切相关.sTNFR1及IgGFc亚基胞膜外区结合的表达和引起免疫耐受的作用研究,为妊娠哮喘发病机制在理论上的新突破,为以sTNFRI-Ig为靶点的妊娠哮喘干预治疗奠定基础.
其他文献
目的 探讨右美托咪定对重度颅脑损伤患者血浆S100B蛋白、颅内压及预后的影响.方法 65例重度颅脑损伤患者随机分为治疗组及对照组,治疗组给予右美托咪定镇静,两组分别于设定时
目的 通过观察丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血后线粒体功能的影响,探讨其脑保护机制.方法 24只健康雄性Wistar大鼠,体质量250～300 g,采用线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞(MCAO)
目的 探讨高危孕产妇入ICU疾病谱、必要的干预措施和孕产妇死亡有关的危险因素.方法 回顾性分析2008-01～2011-12重症监护病房(ICU)收治高危孕产妇重症患者172例,所有患者记录
目的 探讨大承气汤对心脏骤停后综合征(PCAS)兔心肺组织蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达的影响.方法 将20只兔用来制备PCAS模型,另外10只作为正常对照组.采用窒息性心脏骤停制备
目的 观察胰岛素对严重烫伤后早期大鼠血乳酸浓度及乳酸脱氢酶活力的影响.方法 40只SPF级SD大鼠,随机分为三组,分别是假烫伤组(8只)、烫伤组(16只)与胰岛素组(16只).烫伤组与
气管软化症是由于气管缺乏应有的软骨硬度和支撑力造成管腔不同程度塌陷的一种病理现象.成人的气管软化症多见于继发因素,急性有机磷农药中毒(AOPP)后并发气管软化临床并不多
亚低温的临床应用这些年来在各地陆续开展,建立在对亚低温脑保护机制的逐步探索与认知的基础上.近十年来,亚低温脑保护的基础研究进展很快,在部分肯定了前人得出的结论以外,
应激性血糖升高是ICU危重患者中普遍存在的一种现象,过高的血糖可能导致多器官功能的损害.高血糖对机体的损害主要通过两种方式体现,一是持续性的高血糖,二是较大的血糖波动
出诊是院前急救机构的主要工作,甚至是唯一的业务工作,这项看似简单的工作既有很高的技术含量,更有很多的管理要素和很高的管理要求.出诊的第一要务是快,因此,对快速出诊需要
目的研究细胞骨架稳定剂Jasplakinolide(JAS)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU-VECs)增殖、黏附、迁移、体外成血管能力等生物学功能的影响。