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目的建立高效液相色谱法，改进注射用水溶性维生素中生物素的含量测定方法。方法色谱柱为COSMOSIL C18（250×4．6mm，5μm），以缓冲液（取0．5g高氯酸钠，加入1ml磷酸，用水稀释至1000ml）为流动相A，乙腈-甲醇（1：21为流动相B，以流速1．5ml／min进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为200nm。结果生物素在1．5～4．5μg／mg的浓度范围内呈线性关系，r=0．9995（n=5）。平均回收率为101．0％，RSD为0．6％（n=9）。结论本方法简便、准确，不受其他成