【摘 要】
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制备磺胺母核(SH)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测.方法:采用混合酸酐法将本实验室合成的磺胺类药物母核结构物(SH)偶联于牛血清白蛋白(BSA)
【机 构】
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新疆农业大学动物医学学院 乌鲁木齐830052北京农学院动物科学技术学院 北京102206;北京农学院动物科学技术学院 北京102206;吉林省长春市双阳区妇幼保健所 吉林长春130600;
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制备磺胺母核(SH)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测.方法:采用混合酸酐法将本实验室合成的磺胺类药物母核结构物(SH)偶联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SH和包被原OVA-SH,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE法进行鉴定.用BSA-SH免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立SH mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SH mAb,对SH mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定.结果:BSA-SH人工抗原制备成功,SH与BSA的分子结合比约为11.6:1.筛选出5G1、5G2和8D2 3株敏感特异性的杂交瘤细瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1:6.40×102,1:1.28×103和1:3.20×102,腹水效价分别为1:2.56×105,1:5.12×105和1.28×105.5G2株对SH的半数抑制浓度(IC50)为82 ng/mL.纯化后抗体对磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺醋酰(SCT)、磺胺氯吡嗪钠(SCZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲噫唑(SMZ)、磺胺苯吡唑(SPH)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、氨苯磺胺(SSF)和磺胺喹嗯啉(SQ)的交叉反应率分别为108％,86％,105％,85.6％,72％,26％,32％,54.6％,43％,4.6％,0.5％和76％.结论:通过试验获得了抗磺胺母核SH高效价、敏感、特异的mAb,为研制磺胺药多残留检测试剂盒和胶体金免疫层析试纸条奠定了基础.
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