目的构建噬菌体β-GT蛋白的原核重组体系,诱导表达、纯化GST-β-GT融合蛋白并对其进行酶活性测定。方法利用PCR技术从T4噬菌体中扩增β-GT基因;经T-A克隆,获得β-GT基因片段,经酶切连接,构建原核表达载体pGEX-6P-1-β-GT;经测序鉴定序列正确后,将所构建的载体转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。利用IPTG诱导,经10%SDS-PAGE鉴定目的蛋白表达后,采用GST柱纯化目的蛋白;通过酶切和qPCR鉴定其活性。结果成功扩增了噬菌体β-GT基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出GST-β-GT融合蛋白;通过GST柱纯化后获得了GST-β-GT融合蛋白,纯度达95%;通过酶切和qPCR验证,此GST-β-GT融合蛋白具有T4-β-GT酶的活性。结论。原核表达GST-β-GT融合蛋白具有糖基转移酶活性。