【摘 要】
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为了确立稳定的高效率电转化方案,提高构建文库的库容,分别对细菌培养温度、生长状态、电场强度、感受态细胞浓度和体积、外源基因的质量、甘油/甘露醇缓冲液体积等条件进行
【机 构】
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第二军医大学药学院,上海市长征医院内分泌科
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81472283,81270890）资助.
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为了确立稳定的高效率电转化方案,提高构建文库的库容,分别对细菌培养温度、生长状态、电场强度、感受态细胞浓度和体积、外源基因的质量、甘油/甘露醇缓冲液体积等条件进行优化,分析了各因素对转化效率的影响。结果显示:细菌培养温度为16℃,细菌生长的OD600值为0.5,密度梯度离心洗涤法,感受态细胞浓度高于1×1011/m L,并设定电场强度14.25 k V/cm时进行电穿孔,转化效率最高,可达到9×109CFU/μg DNA。研究获得的电转化优化条件为高库容文库的构建提供了一个重要的途径。
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