论文部分内容阅读
【中图分类号】R284.1【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2014）11
【摘要】目的：对胀果甘草进行总黄酮的提取，并对总黄酮提取物进行鉴定分析。方法：用乙醇提取-超声辅助等法制备胀果甘草提取物；用硅胶柱层析法对总黄酮进行精制；用制备薄层色谱法和重结晶法对单体成分进行分离纯化；用理化鉴别法、薄层色谱法和光谱分析法对甘草黄酮类提取物及单体进行分析。结果：制备四种总黄酮粗提物和一种精制总黄酮；分离纯化一种单体成分；对总黄酮类提取物的薄层特点和理化性质进行详细的描述；对单体成分进行结构鉴定。结论： （1）利用碱溶酸沉法提取的总黄酮出膏率低于其他提取法，但总黄酮质量较高； （2）硅胶柱层析法可明显提高甘草总黄酮组分的纯度；（3）所分离纯化的单体成分鉴定为甘草查尔酮A。上述的研究结果为中药材甘草的质量控制提供一定的参考依据
【关键词】胀果甘草；总黄酮；提取制备；分离纯化；鉴定分析
传统医学认为甘草有益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效，有“十方九草”之说。 据《中国药典》2010 年版一部记载其原植物有 3 种，即乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）， 胀果甘草（G.inflate Bat）.和光果甘草（G.glabra L） [1]。国内外已从甘草中分离出l00多种黄酮类化合物、60多种三菇类化合物以及香豆素类、18种氨基酸、多种生物碱、雌性激素和多种有机酸等[2]。甘草黄酮类成分具有明显的抗氧化作用，可预防肿瘤发生，治疗胃溃疡、肝损害，在抗炎和抗变态反应等方面也有明显的药理作用[3]。最新研究还发现，甘草黄酮类物质对艾滋病（HIV） 的治疗有明显的疗效，它对HIV 病毒的抑制作用是甘草甜素的25倍[4]，为甘草黄酮类化合物的进一步研究提供了一定的研究基础。本研究以超声辅助的有机溶剂提取法及氢氧化钙溶解/盐酸沉淀的提取方法与传统的有机溶剂提取法等4种不同方法制备甘草总黄酮提取物，并以出膏率和质量为指标对提取效果进行考察；利用硅胶柱层析法对总黄酮提取物进行精制纯化；利用制备薄层法对单体成分进行分离纯化；利用薄层色谱法和理化鉴定法对各提取物进行鉴定分析。为中药材胀果甘草的品种鉴定、资源考察及产品的质量控制提供一定的参考依据。
1 材料与方法
1.1 药材
新疆胀果甘草：由新疆医科大学天然药物化学教研室提供，新疆医科大学生药教研室帕丽达教授鉴定；新疆光果甘草：由新疆医科大学天然药物化学教研室提供，新疆医科大学生药教研室帕丽达教授鉴定。
1.2 仪器与试剂
（1）仪器：Unity-Inova 600超导核磁共振谱仪（美国Varian公司）；IR Prestige-21红外光谱仪（SHIMADZU）；AB104-N电子天平（Mettler-Toledo Group）；DT200型电子分析天平（常熟市衡器厂）；SHB-111A型循环水式多用真空泵（郑州长城科共贸有限公司）；SK2510HP型数控超声清洗仪（上海科导超声仪有限公司）；N-1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；ZF-20C暗箱式紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）；WRS-1A型数字式熔点测定仪（上海精密科学仪器有限公司），HH-S恒温水浴锅，粉碎机，薄层层析硅胶GF254（德国Merck），普通玻璃仪器。
（2）药品和试剂：无水乙醇，氢氧化钙（AR），甲醇（AR），乙酸乙酯（AR），石油醚（AR），三氯甲烷（AR），1，2-二氯甲烷（AR），甲酸（AR）， 蒸馏水，正己烷（AR），羧甲基纤维素钠，柱层析硅胶，查尔酮A标准品（美国Sigma公司）。
2方法与结果
2.1胀果甘草总黄酮的制备
2.1.1总黄酮粗提物的制备（提取物A，T-A）将干燥胀果甘草根粉碎，过20目筛，精密称取粉末50g，置烧杯中，加75%乙醇400ml，室温浸泡8小时，分别利以下四种方法进行提取，制备粗提物，并根据出膏率和粗品质量评价提取效果：
（1）乙醇-超声辅助提取并用Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀法：将浸泡八小时的甘草乙醇液放入水浴锅中，先60℃加温提取两小时，然后以超声辅助提取25分钟，过滤取滤液，药渣用75%乙醇同法处理1次，体积为200ml，合并滤液；将半体积的饱和Ca（OH）2溶液与滤液混合并搅拌溶解，静置分层，取下层液用浓盐酸滴定至pH2.5，洗出沉淀，静置1h后抽滤。所得固体为粗制胀果甘草总黄酮，经真空干燥得干燥浸膏，出膏率为12.5%。
（2）乙醇提取- Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀法：取50g的甘草粉末，其余条件同2.2.1.1（1）项下，经冷冻干燥得干燥浸膏，出膏率为12.5%。
（3）乙醇-超声辅助提取法（免去Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀操作）：将浸泡八小时的甘草粉末乙醇液放入水浴锅中，用超声辅助提取25分钟，过滤，药渣按同法处理一次，合并浸出液，用旋转蒸发仪减压浓缩至膏状后，经冷冻干燥干燥浸膏，出膏率为17.6%。
（4）简单的乙醇提取法：将浸泡八小时的甘草粉末乙醇液放入水浴锅中，在60℃加温度下提取两小时，过滤，药渣按同法处理一次并过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，经冷冻干燥干燥浸膏，出膏率为14.8%。
2.1.2 胀果甘草总黄酮的精制（提取物B， T-B）
据文献报道，总黄酮精制方法有聚酰胺柱层析法、大孔树脂法和硅胶柱层析法等三种。本研究中，根据预实验结果和以获得胀果甘草种属特异性成分甘草查尔酮A的制备和鉴定为主要目标，利用硅胶柱层析法和制备薄层法对总黄酮进行精制纯化。
（1）利用硅胶柱层析法精制：称取60g柱层析用硅胶，加入足量1，2-二氯乙烷，浸泡1h，按濕法装柱。称取2g胀果甘草总黄酮粗提物，溶于2ml甲醇中，加少量硅胶拌匀成膏状，放入柱层析硅胶上端，覆盖一层滤纸，滤纸上放6粒玻璃珠压住，并用1，2-二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）的洗脱液洗脱，收集具有甘草查尔酮A特征的黄色色带洗脱液；洗脱液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到黄色精制总黄酮提取物（提取物B）0.12g。用乙酸乙酯-石油醚进行重结晶，析出亮黄色结晶 0.013g。 （2）利用制备薄层法精制：用自制的制备薄层板（20×20 cm，0.3mm），将粗制总黄酮提取物A用少量甲醇溶解并点样，以1，2-二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）为展开系统，在紫外光下显色，将具有甘草查尔酮A特征的色带划线标记，并用刀片刮取，用甲醇提取；将6次展开得到的色带的甲醇提取物合并，减压浓缩至干，黄色提取物固体用乙酸乙酯-石油醚重结晶，得少量亮黄色针状结晶。经按光谱分析法（以下2.3.5）对 成分进行结构鉴定。
2.1.3 光果甘草总黄酮粗提物的制备（提取物C，T-C）为了对照两种甘草的薄层色谱特征，以新疆光果甘草根为原料，按2.2.1.1（4）法制备粗制总黄酮C（T-C），得率14.2%，提取物备用。
2.2 胀果甘草总黄酮的鉴定方法所得到的四种总黄酮粗提物（提取物A1，A2， A3， A4）、精制总黄酮（提取物B）和黄色结晶（单体物）等样品经TLC鉴定法、理化鉴定法、光谱鉴定法等鉴定方法进行鉴定。鉴定方法如下：
2.2.1 TLC鉴定法：用进口铝板硅胶GF254板，以醋酸乙酯/甲酸/水（8∶3∶1）为展开剂进行薄层特征的鉴定，观察斑点数量、颜色，计算比移值（Rf）。
2.2.2 物理鉴定法：对各提取物进行形状、颜色和溶解性能的鉴定；对结晶性单体物还进行熔点测定。
2.2.3 化学鉴定法：样品用盐酸-镁粉试液、三氯化铝试液、紫外灯365的荧光特征、氢氧化钠水溶液等黄酮的化学鉴别试剂进行显色特征的鉴定。
2.2.4 单体的光谱鉴定法：单体结晶性物质用核磁共振法和红外光谱法进行结构鉴定。
2.3 胀果甘草总黄酮粗提物的出膏率及提取效果
用四种方法制备的胀果甘草总黄酮提取物的出膏率如表1所示。
2.4 胀果甘草总黄酮提取物的物理鉴定结果
（1）四种总黄酮粗提物（TA1～4）：棕色粉末，均易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙酸乙酯和氯仿，略溶于乙醚和水。
（2）精制总黄酮（TB）：黄色粉末，易溶于乙醇和甲醇，溶于乙酸乙酯、氯仿和乙醚，略溶于石油醚和水。
（3）单体（Monomer， M）：亮黄色针状结晶，熔点（mp）155.7～157.6℃；易溶于乙醇和甲醇，溶于乙酸乙酯、氯仿和乙醚，略溶于石油醚，不溶于水。
2.5 胀果甘草总黄酮提取物的化学鉴定结果：样品乙醇溶液用盐酸镁粉鉴别后呈红色；遇三氯化铝，在紫外灯365下有荧光；遇氢氧化钠水溶液呈亮红色，显示黄酮类化合物的一般显色特征。
2.6 胀果甘草总黄酮提取物的TLC鉴定结果：对胀果甘草的四种总黄酮粗提物（T-A 1-4）、精制总黄酮（T-A）、胀果甘草和光果甘草总黄酮粗提物（T-A和T-C）的TLC进行鉴定，结果如下。
（1）四种总黄酮粗提物（T-A 1-4）：TLC特征如图2所示。从图2可见，粗提物TA-1至TA-4的薄层斑点上，至少有10个斑点，其中7-8个斑点有紫外荧光特征；这些提取物都具有与对照品甘草查尔酮A（LicoA）相适应的亮黄色荧光斑点（Rf=0.89），即适合胀果甘草的特征。
图2.粗提物 TA1～4的薄层特点
（硅胶GF254板，展开剂二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）
此外，提取物TA-1和TA-2的薄层板点上，处于下方的极性大的斑点很弱，说明乙醇-提取并用Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀法制备总黄酮提取物时，总黄酮的纯度略高，可以分离大部分极性大的物质，因此出膏率小于其他提取方法。
（2）精制总黄酮（TB）与粗制总黄酮提取物（TA）：薄层特征的对照如图3所示。从图3可见，精制总黄酮显示6个斑点，与粗品对照，下方极性大的2-3个半点消失，几乎均为带荧光的黄至蓝色斑点，有明显的甘草查尔酮A的斑点出现。结果表明，经硅胶柱层析法纯化之后，可最大限度的富集总黄酮组分，可提高纯化的效果。（硅胶GF254板，展开剂二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）。
图3.精制总黄酮（TB）和粗提物（TA）薄层特点特征
2.7 单体成分的光谱鉴定结果：胀果甘草中单体化合物结构鉴定结果如下：金黄色的针状结晶（乙酸乙酯-石油醚），紫外燈下呈亮黄色荧光，m.p.：155.7～157.6℃，易溶于氯仿、乙酸乙酯，溶于甲醇、乙醇、丙酮，微溶于石油醚，不溶于水。
盐酸-镁粉反应呈微红色，与FeCl3溶液反应呈黄色沉淀，遇碱性显色试剂呈橙色，遇到硫酸呈桔红色。IR（红外光谱，KBr 压片）υcm-1：3217，2964，1650，1604，1587，1556，1510，1446，1346，1290，1261，1215，1166，1078，1039，1006，904，837。1H-NMR（核磁共振谱，Varian 600， CDCl3） δppm：8.03（1H，d，J=16Hz，H-β），7.98（2H，d，J=8.5Hz，H-2’，6’），7.58（1H，d，J=16Hz，H-α），7.47（1H，s，H-6），6.96（2H，d，J=8.5Hz，H-3’，5’），6.45（1H，s，H-3），6.20（1H，dd，J=18，10Hz，H-2’’），5.35（1H，dd，J=18.1Hz，H-3’’），5.32（1H，dd，J=10.1Hz，H-3’’），3.87（3H，s，OCH3），2.19（2H，s，OH-4，4’），1.45（6H，s，CH3-4’’，5’’）。理化鉴定结果与文献[5]报道一致。因此，将此单体成分鉴定为甘草查尔酮A（如图5）。
图5.单体甘草查尔酮A的学结构
3讨论
本实验中，以新疆胀果甘草为研究对象，首先通过四种提取方法制备总黄酮粗提物；然后通过柱层析富集分离法制备其精制总黄酮类组分；利用物理化学方法和定性薄层色谱法对总黄酮提取物进行鉴定，其理化性质和色谱特征进行描述；利用制备薄层层析法和重结晶法对单体成分甘草查尔酮A进行分离纯化；利用物理化学法、红外光谱法和核磁共振法对单体成分的化学结构进行鉴定。从而为胀果甘草总黄酮的提取制备、分离纯化、理化鉴别、色谱和光谱鉴定等方面获得了较好的实验结果。此外，通过利用简单的薄层色谱法，对甘草黄酮类提取物的不同制备方法的效果进行初步的评价；同时利用薄层色谱法、以甘草查尔酮A为对照品，对胀果甘草进行有效的鉴定，从而建立了用薄层色谱法对胀果甘草药材品种的快速鉴定方法，从而为甘草药材的快速生药学鉴定提供了简便快速的鉴定方法。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版社，2010：80-81.
[2]陶哺，刘晓清，屈振刚.甘草化学成分研究进展[J].河北农业科学，2009，3（13）：77-79.
[3]付玉杰，祖元刚，李春英，等.超临界CO2萃取甘草中甘草次酸的工艺研究[J].中草药，2003，34（1）31-33.
[4]Wei W. Study on the extraction， separation and purification methods of medical components for liquor ice [J] . Dalian University of Technology， 2005（6） ： 1-2.
[5]李宏智，木合布力.阿布力孜，闵杰.甘草查尔酮A的高效制备工艺研究[J].天然产物研究与开发，2010，22（增刊）： 112-114
【摘要】目的：对胀果甘草进行总黄酮的提取，并对总黄酮提取物进行鉴定分析。方法：用乙醇提取-超声辅助等法制备胀果甘草提取物；用硅胶柱层析法对总黄酮进行精制；用制备薄层色谱法和重结晶法对单体成分进行分离纯化；用理化鉴别法、薄层色谱法和光谱分析法对甘草黄酮类提取物及单体进行分析。结果：制备四种总黄酮粗提物和一种精制总黄酮；分离纯化一种单体成分；对总黄酮类提取物的薄层特点和理化性质进行详细的描述；对单体成分进行结构鉴定。结论： （1）利用碱溶酸沉法提取的总黄酮出膏率低于其他提取法，但总黄酮质量较高； （2）硅胶柱层析法可明显提高甘草总黄酮组分的纯度；（3）所分离纯化的单体成分鉴定为甘草查尔酮A。上述的研究结果为中药材甘草的质量控制提供一定的参考依据
【关键词】胀果甘草；总黄酮；提取制备；分离纯化；鉴定分析
传统医学认为甘草有益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效，有“十方九草”之说。 据《中国药典》2010 年版一部记载其原植物有 3 种，即乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）， 胀果甘草（G.inflate Bat）.和光果甘草（G.glabra L） [1]。国内外已从甘草中分离出l00多种黄酮类化合物、60多种三菇类化合物以及香豆素类、18种氨基酸、多种生物碱、雌性激素和多种有机酸等[2]。甘草黄酮类成分具有明显的抗氧化作用，可预防肿瘤发生，治疗胃溃疡、肝损害，在抗炎和抗变态反应等方面也有明显的药理作用[3]。最新研究还发现，甘草黄酮类物质对艾滋病（HIV） 的治疗有明显的疗效，它对HIV 病毒的抑制作用是甘草甜素的25倍[4]，为甘草黄酮类化合物的进一步研究提供了一定的研究基础。本研究以超声辅助的有机溶剂提取法及氢氧化钙溶解/盐酸沉淀的提取方法与传统的有机溶剂提取法等4种不同方法制备甘草总黄酮提取物，并以出膏率和质量为指标对提取效果进行考察；利用硅胶柱层析法对总黄酮提取物进行精制纯化；利用制备薄层法对单体成分进行分离纯化；利用薄层色谱法和理化鉴定法对各提取物进行鉴定分析。为中药材胀果甘草的品种鉴定、资源考察及产品的质量控制提供一定的参考依据。
1 材料与方法
1.1 药材
新疆胀果甘草：由新疆医科大学天然药物化学教研室提供，新疆医科大学生药教研室帕丽达教授鉴定；新疆光果甘草：由新疆医科大学天然药物化学教研室提供，新疆医科大学生药教研室帕丽达教授鉴定。
1.2 仪器与试剂
（1）仪器：Unity-Inova 600超导核磁共振谱仪（美国Varian公司）；IR Prestige-21红外光谱仪（SHIMADZU）；AB104-N电子天平（Mettler-Toledo Group）；DT200型电子分析天平（常熟市衡器厂）；SHB-111A型循环水式多用真空泵（郑州长城科共贸有限公司）；SK2510HP型数控超声清洗仪（上海科导超声仪有限公司）；N-1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；ZF-20C暗箱式紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）；WRS-1A型数字式熔点测定仪（上海精密科学仪器有限公司），HH-S恒温水浴锅，粉碎机，薄层层析硅胶GF254（德国Merck），普通玻璃仪器。
（2）药品和试剂：无水乙醇，氢氧化钙（AR），甲醇（AR），乙酸乙酯（AR），石油醚（AR），三氯甲烷（AR），1，2-二氯甲烷（AR），甲酸（AR）， 蒸馏水，正己烷（AR），羧甲基纤维素钠，柱层析硅胶，查尔酮A标准品（美国Sigma公司）。
2方法与结果
2.1胀果甘草总黄酮的制备
2.1.1总黄酮粗提物的制备（提取物A，T-A）将干燥胀果甘草根粉碎，过20目筛，精密称取粉末50g，置烧杯中，加75%乙醇400ml，室温浸泡8小时，分别利以下四种方法进行提取，制备粗提物，并根据出膏率和粗品质量评价提取效果：
（1）乙醇-超声辅助提取并用Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀法：将浸泡八小时的甘草乙醇液放入水浴锅中，先60℃加温提取两小时，然后以超声辅助提取25分钟，过滤取滤液，药渣用75%乙醇同法处理1次，体积为200ml，合并滤液；将半体积的饱和Ca（OH）2溶液与滤液混合并搅拌溶解，静置分层，取下层液用浓盐酸滴定至pH2.5，洗出沉淀，静置1h后抽滤。所得固体为粗制胀果甘草总黄酮，经真空干燥得干燥浸膏，出膏率为12.5%。
（2）乙醇提取- Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀法：取50g的甘草粉末，其余条件同2.2.1.1（1）项下，经冷冻干燥得干燥浸膏，出膏率为12.5%。
（3）乙醇-超声辅助提取法（免去Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀操作）：将浸泡八小时的甘草粉末乙醇液放入水浴锅中，用超声辅助提取25分钟，过滤，药渣按同法处理一次，合并浸出液，用旋转蒸发仪减压浓缩至膏状后，经冷冻干燥干燥浸膏，出膏率为17.6%。
（4）简单的乙醇提取法：将浸泡八小时的甘草粉末乙醇液放入水浴锅中，在60℃加温度下提取两小时，过滤，药渣按同法处理一次并过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，经冷冻干燥干燥浸膏，出膏率为14.8%。
2.1.2 胀果甘草总黄酮的精制（提取物B， T-B）
据文献报道，总黄酮精制方法有聚酰胺柱层析法、大孔树脂法和硅胶柱层析法等三种。本研究中，根据预实验结果和以获得胀果甘草种属特异性成分甘草查尔酮A的制备和鉴定为主要目标，利用硅胶柱层析法和制备薄层法对总黄酮进行精制纯化。
（1）利用硅胶柱层析法精制：称取60g柱层析用硅胶，加入足量1，2-二氯乙烷，浸泡1h，按濕法装柱。称取2g胀果甘草总黄酮粗提物，溶于2ml甲醇中，加少量硅胶拌匀成膏状，放入柱层析硅胶上端，覆盖一层滤纸，滤纸上放6粒玻璃珠压住，并用1，2-二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）的洗脱液洗脱，收集具有甘草查尔酮A特征的黄色色带洗脱液；洗脱液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到黄色精制总黄酮提取物（提取物B）0.12g。用乙酸乙酯-石油醚进行重结晶，析出亮黄色结晶 0.013g。 （2）利用制备薄层法精制：用自制的制备薄层板（20×20 cm，0.3mm），将粗制总黄酮提取物A用少量甲醇溶解并点样，以1，2-二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）为展开系统，在紫外光下显色，将具有甘草查尔酮A特征的色带划线标记，并用刀片刮取，用甲醇提取；将6次展开得到的色带的甲醇提取物合并，减压浓缩至干，黄色提取物固体用乙酸乙酯-石油醚重结晶，得少量亮黄色针状结晶。经按光谱分析法（以下2.3.5）对 成分进行结构鉴定。
2.1.3 光果甘草总黄酮粗提物的制备（提取物C，T-C）为了对照两种甘草的薄层色谱特征，以新疆光果甘草根为原料，按2.2.1.1（4）法制备粗制总黄酮C（T-C），得率14.2%，提取物备用。
2.2 胀果甘草总黄酮的鉴定方法所得到的四种总黄酮粗提物（提取物A1，A2， A3， A4）、精制总黄酮（提取物B）和黄色结晶（单体物）等样品经TLC鉴定法、理化鉴定法、光谱鉴定法等鉴定方法进行鉴定。鉴定方法如下：
2.2.1 TLC鉴定法：用进口铝板硅胶GF254板，以醋酸乙酯/甲酸/水（8∶3∶1）为展开剂进行薄层特征的鉴定，观察斑点数量、颜色，计算比移值（Rf）。
2.2.2 物理鉴定法：对各提取物进行形状、颜色和溶解性能的鉴定；对结晶性单体物还进行熔点测定。
2.2.3 化学鉴定法：样品用盐酸-镁粉试液、三氯化铝试液、紫外灯365的荧光特征、氢氧化钠水溶液等黄酮的化学鉴别试剂进行显色特征的鉴定。
2.2.4 单体的光谱鉴定法：单体结晶性物质用核磁共振法和红外光谱法进行结构鉴定。
2.3 胀果甘草总黄酮粗提物的出膏率及提取效果
用四种方法制备的胀果甘草总黄酮提取物的出膏率如表1所示。
2.4 胀果甘草总黄酮提取物的物理鉴定结果
（1）四种总黄酮粗提物（TA1～4）：棕色粉末，均易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙酸乙酯和氯仿，略溶于乙醚和水。
（2）精制总黄酮（TB）：黄色粉末，易溶于乙醇和甲醇，溶于乙酸乙酯、氯仿和乙醚，略溶于石油醚和水。
（3）单体（Monomer， M）：亮黄色针状结晶，熔点（mp）155.7～157.6℃；易溶于乙醇和甲醇，溶于乙酸乙酯、氯仿和乙醚，略溶于石油醚，不溶于水。
2.5 胀果甘草总黄酮提取物的化学鉴定结果：样品乙醇溶液用盐酸镁粉鉴别后呈红色；遇三氯化铝，在紫外灯365下有荧光；遇氢氧化钠水溶液呈亮红色，显示黄酮类化合物的一般显色特征。
2.6 胀果甘草总黄酮提取物的TLC鉴定结果：对胀果甘草的四种总黄酮粗提物（T-A 1-4）、精制总黄酮（T-A）、胀果甘草和光果甘草总黄酮粗提物（T-A和T-C）的TLC进行鉴定，结果如下。
（1）四种总黄酮粗提物（T-A 1-4）：TLC特征如图2所示。从图2可见，粗提物TA-1至TA-4的薄层斑点上，至少有10个斑点，其中7-8个斑点有紫外荧光特征；这些提取物都具有与对照品甘草查尔酮A（LicoA）相适应的亮黄色荧光斑点（Rf=0.89），即适合胀果甘草的特征。
图2.粗提物 TA1～4的薄层特点
（硅胶GF254板，展开剂二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）
此外，提取物TA-1和TA-2的薄层板点上，处于下方的极性大的斑点很弱，说明乙醇-提取并用Ca（OH）2溶解/盐酸沉淀法制备总黄酮提取物时，总黄酮的纯度略高，可以分离大部分极性大的物质，因此出膏率小于其他提取方法。
（2）精制总黄酮（TB）与粗制总黄酮提取物（TA）：薄层特征的对照如图3所示。从图3可见，精制总黄酮显示6个斑点，与粗品对照，下方极性大的2-3个半点消失，几乎均为带荧光的黄至蓝色斑点，有明显的甘草查尔酮A的斑点出现。结果表明，经硅胶柱层析法纯化之后，可最大限度的富集总黄酮组分，可提高纯化的效果。（硅胶GF254板，展开剂二氯乙烷/甲醇/乙酸乙酯（3：0.5：1）。
图3.精制总黄酮（TB）和粗提物（TA）薄层特点特征
2.7 单体成分的光谱鉴定结果：胀果甘草中单体化合物结构鉴定结果如下：金黄色的针状结晶（乙酸乙酯-石油醚），紫外燈下呈亮黄色荧光，m.p.：155.7～157.6℃，易溶于氯仿、乙酸乙酯，溶于甲醇、乙醇、丙酮，微溶于石油醚，不溶于水。
盐酸-镁粉反应呈微红色，与FeCl3溶液反应呈黄色沉淀，遇碱性显色试剂呈橙色，遇到硫酸呈桔红色。IR（红外光谱，KBr 压片）υcm-1：3217，2964，1650，1604，1587，1556，1510，1446，1346，1290，1261，1215，1166，1078，1039，1006，904，837。1H-NMR（核磁共振谱，Varian 600， CDCl3） δppm：8.03（1H，d，J=16Hz，H-β），7.98（2H，d，J=8.5Hz，H-2’，6’），7.58（1H，d，J=16Hz，H-α），7.47（1H，s，H-6），6.96（2H，d，J=8.5Hz，H-3’，5’），6.45（1H，s，H-3），6.20（1H，dd，J=18，10Hz，H-2’’），5.35（1H，dd，J=18.1Hz，H-3’’），5.32（1H，dd，J=10.1Hz，H-3’’），3.87（3H，s，OCH3），2.19（2H，s，OH-4，4’），1.45（6H，s，CH3-4’’，5’’）。理化鉴定结果与文献[5]报道一致。因此，将此单体成分鉴定为甘草查尔酮A（如图5）。
图5.单体甘草查尔酮A的学结构
3讨论
本实验中，以新疆胀果甘草为研究对象，首先通过四种提取方法制备总黄酮粗提物；然后通过柱层析富集分离法制备其精制总黄酮类组分；利用物理化学方法和定性薄层色谱法对总黄酮提取物进行鉴定，其理化性质和色谱特征进行描述；利用制备薄层层析法和重结晶法对单体成分甘草查尔酮A进行分离纯化；利用物理化学法、红外光谱法和核磁共振法对单体成分的化学结构进行鉴定。从而为胀果甘草总黄酮的提取制备、分离纯化、理化鉴别、色谱和光谱鉴定等方面获得了较好的实验结果。此外，通过利用简单的薄层色谱法，对甘草黄酮类提取物的不同制备方法的效果进行初步的评价；同时利用薄层色谱法、以甘草查尔酮A为对照品，对胀果甘草进行有效的鉴定，从而建立了用薄层色谱法对胀果甘草药材品种的快速鉴定方法，从而为甘草药材的快速生药学鉴定提供了简便快速的鉴定方法。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版社，2010：80-81.
[2]陶哺，刘晓清，屈振刚.甘草化学成分研究进展[J].河北农业科学，2009，3（13）：77-79.
[3]付玉杰，祖元刚，李春英，等.超临界CO2萃取甘草中甘草次酸的工艺研究[J].中草药，2003，34（1）31-33.
[4]Wei W. Study on the extraction， separation and purification methods of medical components for liquor ice [J] . Dalian University of Technology， 2005（6） ： 1-2.
[5]李宏智，木合布力.阿布力孜，闵杰.甘草查尔酮A的高效制备工艺研究[J].天然产物研究与开发，2010，22（增刊）： 112-114