[目的]研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白核定位信号(nuclear localization signal,NLS)突变对其毒力和复制能力的影响。[方法]根据NDV SS1株P基因和F基因上的AgeⅠ和Bstz17Ⅰ酶切位点设计两对突变引物,通过overlap PCR方法获得M蛋白NLS突变的片段,将其替换到pNDV/SS1GFP中获得全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。将全长质粒与三个辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞,60 h后收集细胞及其上清接种SPF鸡胚;对拯救的突变体病毒通过血凝(hemagglutination,HA)试验、免疫荧光试验和M基因测序进行鉴定。另外,对突变体病毒进行M蛋白亚细胞定位观察,以及病毒的生物学特性、空斑形成能力和体外增殖能力测定。[结果]成功构建M蛋白NLS突变的全长质粒p NDV/SS1GFP-M/NLSm。细胞转染物接种鸡胚后的第1代尿囊液无HA效价,盲传3代才能检测到拯救病毒的HA效价。进一步的免疫荧光试验和M基因测序结果显示,拯救的病毒是M蛋白NLS突变体病毒r SS1GFP-M/NLSm。对M蛋白亚细胞定位结果分析发现,突变体病毒M蛋白主要定位在细胞质,而亲本病毒M蛋白主要定位在细胞核。此外,与亲本病毒的毒力(MDT为54 h,ICPI为1.88,IVPI为2.80)和体外复制增殖能力相比,突变体病毒的毒力(MDT大于120 h,ICPI为1.63,IVPI为2.03)、在鸡胚上的复制能力以及在DF-1细胞中的空斑形成能力显著降低,并且感染细胞后产生的细胞病变轻微,M蛋白和绿色荧光蛋白的表达量低,说明M蛋白NLS突变使病毒的体外增殖能力受到抑制。[结论]NLS突变导致的M蛋白细胞核定位功能丧失可明显降低NDV的毒力和复制能力。