【摘 要】
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目的 构建心肌L型钙通道片段PreIQ及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化和活性鉴定.方法 将PreIQ及其突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载
【机 构】
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中国医科大学药学院药物毒理学教研室,沈阳,110001;中国医科大学药学院药物毒理学教研室,沈阳110001;中国医科大学心血管研究所,沈阳110001
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目的 构建心肌L型钙通道片段PreIQ及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化和活性鉴定.方法 将PreIQ及其突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导PreIQ及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化.采用SDS-PAGE鉴定目的蛋白分子质量和相对纯度.采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度.采用pull-down法检测纯化后蛋白的活性.结果 PreIQ及其突变体融合蛋白得到了大量表达;纯化的PreIQ及其突变体具有较高的纯度;纯化后蛋白能与钙调蛋白(CaM)结合,具有生物活性.结论 本研究成功构建了PreIQ及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得具有生物活性的PreIQ及其突变体融合蛋白,为深入研究PreIQ的生能学功能奠定基础.
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