人白血病细胞HL-60凋亡启动时相的亚细胞蛋白质组学研究

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目的:建立全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞凋亡启动模型,分析凋亡启动时细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白的表达情况。方法:体外培养HL-60细胞,氮唑蓝(MTT)比色法检HL-60细胞测增殖活性,流式细胞术(FCM)检HL-60细胞测细胞凋亡和细胞周期分布;高速离心法分离对照组与凋亡启动时相的HL-60细胞核、膜和细胞器以及细胞质等组分蛋白;双向电泳(2-DE)HL-60细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白,图像分析软件分析2-DE图谱,筛选差异表达蛋白,并进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定。结果:ATRA明显抑制HL-60细胞增殖,并随浓度、时间的增加,抑制作用也越显著;以1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞48 h早期凋亡比例为13.21%,细胞形态也存在明显变化;筛选出22个差异表达蛋白点,其中5个蛋白在凋亡启动时表达上调,15个蛋白表达下调,2个蛋白只在凋亡启动时表达;它们的功能主要涉及与细胞凋亡相关的蛋白,与细胞分化、增殖相关的蛋白和其它蛋白。结论:1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞生长48 h,成功建立细胞凋亡启动模型;凋亡启动时相的HL-60细胞质、膜和细胞器以及细胞总蛋白的表达都存在差异,这些差异表达蛋白可能在细胞凋亡启动时起重要作用。
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