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【摘要】 目的：研究妊娠期高血壓（HDCP）患者抗心磷脂抗体（ACA）及抗β2-糖蛋白1（β2-GP1）抗体水平与妊娠结局的关系，深入探讨抗磷脂抗体（APA）在HDCP发病中的作用，为临床预防及治疗HDCP提供新的理论依据。方法：选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测孕妇ACA及抗β2-GP1抗体水平，根据ELISA法检测结果分组，观察组A为仅ACA阳性孕妇，观察组B仅抗β2-GP1抗体阳性孕妇，对照组为ACA及抗β2-GP1抗体均阴性孕妇，每组均纳入30例。分析三组患者不良妊娠结局，以观察组A和观察组B为对象进行研究，分析APA水平与妊娠结局的相关性，分析不同抗磷脂抗体间相关性。结果：观察A组不良妊娠结局总发生率为46.67%，明显高于观察组A（36.66%）和对照组（10.00%），三组患者不良妊娠结局比较差异有统计学意义（P<0.05）。观察组A和观察组B两组患者ACA-IgM平均为（11.46±4.51）GPLU/mL、ACA-IgG平均为（9.42±3.51）MPLU/mL、抗β2-GP1抗体平均为（104.63±21.83）U/mL。抗β2-GPI抗体与围产儿死亡呈正相关（P<0.05），ACA-IgM、ACA-IgG和抗β2-GP1抗体均与早产呈正相关（P<0.05），ACA-IgM与FGR呈正相关（P<0.05）。HDCP患者的ACA-IgG、ACA-IgM和抗β2-GP1抗体三者两两间均呈正相关（P<0.05）。结论：HDCP患者ACA及抗β2-GP1抗体与不良妊娠结局具有一定相关性，APA水平的检测对预测不良妊娠结局具有一定参考。
【关键词】 妊娠期高血压; 抗心磷脂抗体; 抗β2-GP1抗体; 妊娠结局; 相关性
【Abstract】 Objective：To study the relationship between antiphospholipid antibody（ACA）and anti beta 2- glycoprotein 1（β2-GP1）antibody level and pregnancy outcome in patients with pregnancy induced hypertension（HDCP），to explore the role of anti phospholipid antibody（APA）in the pathogenesis of HDCP，and provide a new theoretical basis for the clinical prevention and treatment of HDCP.Method：The maternal ACA and β2-GP1 antibody levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）in pregnant women of our hospital.The results were grouped according to the results of ELISA，the observation group A was only ACA positive，the observation group B was only resistant to positive pregnant women with β2-GP1 antibody，and the control group was ACA and β2-GP1 resistance，all negative pregnant women，30 cases in each group.The adverse pregnancy outcomes of the three groups were analyzed.The study was conducted in observation group A and B，the correlation between antiphospholipid antibody level and pregnancy outcome was analyzed，and the correlation between different antiphospholipid antibodies was analyzed.Result：The total incidence of undesirable pregnancy outcome in observation group A was 46.67%，which was significantly higher than that in observation group B（36.66%）and control group（10.00%）.There was significant difference in adverse pregnancy outcomes in the three group（P<0.05）.The level of ACA-IgM in the two groups of group A and group B was（11.46±4.51）GPLU/mL，ACA-IgG was（9.42±3.51）MPLU/mL andβ2-GP1 was（104.63±21.83）U/Ml，there was a positive correlation between theβ2-GP1 antibody and perinatal mortality（P<0.05）;ACA-IgM，ACA-IgG and β2-GP1 antibody were positively correlated with preterm labor（P<0.05）;ACA-IgM and FGR were positively correlated（P<0.05）.There was a positive correlation between ACA-IgG，ACA-IgM andβ2-GP1 antibody in HDCP patients（P<0.05）.Conclusion：There is a certain correlation between ACA andβ2-GP1 antibody in HDCP patients and bad pregnancy outcome.The detection of APA level has a certain reference to the prediction of bad pregnancy outcome. 【Key words】 Gestational hypertension; Anticardiolipin antibody; Anti β2-GP1 antibody; Pregnancy outcome; Correlation
First-author’s address：Central Hospital of Longhua District，Shenzhen 518110，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.04.040
妊娠期高血压（hypertension disorder complicating，HDCP）是临床产科常见并发症，患者常表现出水肿、高血压和蛋白尿等典型临床症状。调查显示，HDCP是引发不良围生儿结局的重要因素[1]。尽管HDCP发病机制尚不十分明确，但国内外研究广泛认为多因素多因子综合作用是导致HDCP发病的重要原因。而在建立的众多HDCP发病机制学说中，胎盘缺血缺氧学说受到更多专家的青睐，血管内皮细胞在这种状态下损伤严重，全身小血管发生痉挛，最终衍生出HDCP临床症状[2]。部分研究证实，抗磷脂综合征（antiphospholipid syndrome，APS）是HDCP中重要的发病危险因素，APS诊断要点在于抗磷脂抗体（antiphospholipid antibody，APA）水平的检测。而抗心磷脂抗体（anticardiolipin antibody，ACA）与抗β2-糖蛋白1（β2-glycoprotein 1，β2-GP1）抗体均参与血管内皮细胞损伤过程，抗β2-GP1抗体是且APA的重要辅助因子[3-4]。因此，检测ACA及抗β2-GP1抗体水平对于HDCP患者不良妊娠结局的评估意义重大。本文选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇为研究对象，深入探讨了ACA及抗β2-GP1抗体水平与患者妊娠结局的关系，現报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测孕妇ACA及抗β2-GP1抗体水平，根据ELISA法检测结果分组，观察组A为仅ACA阳性（ACA-IgM>7 MPLU/mL和/或以ACA-IgG>10 GPLU/mL）孕妇;观察组B仅抗β2-GP1抗体阳性（抗β2-GP1抗体>90 U/mL）孕妇;对照组为ACA及抗β2-GP1抗体均阴性孕妇，每组各纳入30例。纳入标准：符合《妇产科学》中关于妊娠期高血压疾病的诊断标准[5];支持并同意本项研究者。排除标准：既往有免疫疾病史;胎儿畸形;胎儿遗传性疾病。本研究已获得本院伦理委员会批准。
1.2 方法 分别抽取三组患者产前空腹状态静脉血3 mL，置于含10%（体积比）枸橼酸钠抗凝液的食管中，室温静置30 min后，采用离心机以3 000 r/min转速离心15 min，将上层分离血清置于-20 ℃冰箱中保存备用。检测步骤如下：（1）制备缓冲溶液和洗液，以体积比样本：缓冲液=1︰100稀释样品，制备样品标本;（2）准备好充足的微孔板条，每个微孔中加入缓冲液已稀释样本和100 μL质控品，室温培育30 min，将板条倒空，用洗液反复冲洗至少3遍;（3）微孔中加入100 μL酶结合物溶液，室温培育15 min，将板条倒空，用洗液反复冲洗至少3遍;（4）微孔中加入100 μL TMB底物溶液，室温培育15 min，再加入100 μL反应终止溶液，室温放置5 min;（5）使用酶联免疫吸附法（ELISA）分析仪读取450 nm波长处的吸光度值，仪器自动采用拟合曲线计算ACA-IgM、ACA-IgG 与抗β2-GP1抗体水平。
1.3 观察指标 观察三组患者的不良妊娠结局，包括围产儿死亡、早产、胎盘早剥、死胎、胎儿生长受限（fetal growth restriction，FGR）。
1.4 统计学处理 使用SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用率（%）表示，比较采用字2检验，采用Spearman等级相关分析研究参数间相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组患者基线资料比较 三组患者基线资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。见表1。
2.2 三组患者不良妊娠结局比较 观察组A不良妊娠结局总发生率为46.67%，明显高于观察组B36.66%和对照组10.00%，三组患者不良妊娠结局比较差异有统计学意义（字2=10.058，P=0.007）。
2.3 APA水平与妊娠结局的相关性分析 以观察组A和观察组B为对象进行研究，两组患者ACA-IgM平均为（11.46±4.51）GPLU/mL、ACA-IgG平均为（9.42±3.51）MPLU/mL、抗β2-GP1抗体平均为（104.63±21.83）U/mL。抗β2-GP1抗体与围产儿死亡呈正相关（P<0.05）;ACA-IgM、ACA-IgG和抗β2-GP1抗体均与早产呈正相关（P<0.05）;ACA-IgM与FGR呈正相关（P<0.05）。见表3。
2.4 不同抗磷脂抗体间相关性分析 150例HDCP患者的ACA-IgG、ACA-IgM和抗β2-GP1抗体均呈正相关（P<0.05），且ACA-IgG和ACA-IgM间呈正相关（P<0.05）。见表4。
3 讨论
HDCP是临床妊娠常见病，患者多于妊娠20周后，以表现出高血压等症状的形式发病，患者可伴随多脏器功能损伤，严重威胁着孕妇及胎儿生命安全。目前临床尚未探明HDCP病理学基础，但认为其会导致血管内皮细胞损伤，全身小血管痉挛，从而影响重要脏器官血液灌注量，引发不良妊娠结局[6]。国内外临床专家致力于HDCP发病机制的研究，也建立了各种发病机制学说，其中的胎盘缺血缺氧学说被广泛接受[7]。血管内皮细胞在胎盘缺血缺氧状态下损伤严重，全身小血管发生痉挛，最终衍生出HDCP临床症状。多项研究认为，ACA是一种自身抗体，其以心磷脂为靶抗原，多见于系统性红斑狼疮及其他自身免疫性疾病中[8-9]。伴随对ACA的深入研究，人们逐渐对ACA和HDCP的关系重视起来，ACA存在ACA-IgM、ACA-IgG和ACA-IgA三种亚型，ACA可降低血小板水量，对血管内皮细胞形成损害，形成胎盘微血栓，增加不良妊娠结局风险[10-12]。曾有报道，与正常产妇相比，HDCP患者ACA阳性率升高，ACA检测对于HDCP预测具有较高特异性和敏感性[13]。抗β2-GP1抗体是ACA和磷脂相结合的辅助因子，具有降低抗凝血酶活性，提高内皮细胞分子水平表达和促进高凝血液状态的作用[14-16]。为研究HDCP患者妊娠结局与APA的关系，本文选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇进行研究。 本研究分析APA水平与妊娠结局的相关性结果显示，仅ACA阳性和仅抗β2-GP1抗体阳性孕妇ACA-IgM平均为（11.46±4.51）GPLU/mL、ACA-IgG平均为（9.42±3.51）MPLU/mL、抗β2-GP1抗体平均为（104.63±21.83）U/mL。抗β2-GP1抗体与围产儿死亡呈正相关，ACA-IgM、ACA-IgG和抗β2-GP1抗体均与早产呈正相关，ACA-IgM与FGR呈正相关。提示，抗磷脂抗体水平对于不良妊娠结局具有一定影响，可为后续分子生物学研究提供基础[17-18]。
HDCP患者常见不良妊娠结局有围产儿死亡、早产、胎盘早剥、死胎、FGR等。本研究结果显示，仅ACA阳性孕妇不良妊娠结局总发生率为46.67%，仅抗β2-GP1抗体阳性孕妇不良妊娠结局总发生率为36.66%，均明显高于ACA及抗β2-GP1抗体均阴性孕妇（10.00%）。分析其中的原因，APA导致滋养细胞受损，人绒毛促性腺激素分泌量减少，不利于胚胎置入;APA导致血管内皮细胞受损，血小板聚集严重，纤溶与抗纤溶间建立的平衡被打破，血液处于高凝状态，形成血栓[19]。此外，分析不同抗磷脂抗体间相关性结果显示，ACA-IgG、ACA-IgM和抗β2-GP1抗体两两间均呈正相关，符合相关文献[20]报道结果。
总之，HDCP患者ACA及抗β2-GP1抗体与不良妊娠结局具有一定相关性，APA水平的检测，对预测不良妊娠结局具有一定参考。
参考文献
[1]金美媛，郑能能，熊智慧.中西医结合治疗重度子痫前期与子痫型妊娠期高血压的临床分析[J].中华中医药学刊，2018，36（4）：949-951.
[2] Wang Y，Shi D，Chen L.Lipid profile and cytokines in hypertension of pregnancy：A comparison of preeclampsia therapies[J].J Clin Hypertens（Greenwich），2018，20（2）：394-399.
[3]谢桂英，马玉燕.拉贝洛尔对中重度妊娠期高血压疾病患者心肾功能及妊娠结局的影响及机制[J].山东医药，2017，57（21）：74-76.
[4]黄月婷，张建平.妊娠合并症及并发症与血液指标异常的观察与处理[J].实用妇产科杂志，2016，32（9）：655-658.
[5]谢幸，苟文丽.妇产科学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2013.
[6]魏继文，吴萍.妊娠期高血压疾病相关影响因素分析[J].重庆医学，2016，45（22）：3078-3080.
[7] Wang Y，Liu R X，Liu H.Association of adiponectin gene polymorphisms with hypertensive disorder complicating pregnancy and disorders of lipid metabolism[J].Genet Mol Res，2015，14（4）：15213-15223.
[8]倪琰琰，程蔚蔚.早发型子痫前期的预测研究进展[J].东南大学学报（医学版），2016，35（1）：135-138.
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[10] Zhong W，Peng H，Tian A.Expression of miRNA-1233 in placenta from patients with hypertensive disorder complicating pregnancy and its role in disease pathogenesis[J].Int J Clin Exp Med，2015，8（6）：9121-9127.
[11]林静，李红.妊娠期高血压疾病孕妇血清尿酸监测的临床意义[J].中国妇产科临床杂志，2016，17（6）：546-548.
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[19]范玉芹，李磊，王謝桐.免疫调控在子痫前期早期干预中的作用和评价[J].中国实用妇科与产科杂志，2014，30（10）：771-774.
[20]张艳梅，杜彦玫，王冬梅.孕妇妊娠期高血压合并感染围产儿预后的研究[J].中华医院感染学杂志，2014，24（4）：986-987，990.
（收稿日期：2018-07-19） （本文编辑：周亚杰）
【关键词】 妊娠期高血压; 抗心磷脂抗体; 抗β2-GP1抗体; 妊娠结局; 相关性
【Abstract】 Objective：To study the relationship between antiphospholipid antibody（ACA）and anti beta 2- glycoprotein 1（β2-GP1）antibody level and pregnancy outcome in patients with pregnancy induced hypertension（HDCP），to explore the role of anti phospholipid antibody（APA）in the pathogenesis of HDCP，and provide a new theoretical basis for the clinical prevention and treatment of HDCP.Method：The maternal ACA and β2-GP1 antibody levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）in pregnant women of our hospital.The results were grouped according to the results of ELISA，the observation group A was only ACA positive，the observation group B was only resistant to positive pregnant women with β2-GP1 antibody，and the control group was ACA and β2-GP1 resistance，all negative pregnant women，30 cases in each group.The adverse pregnancy outcomes of the three groups were analyzed.The study was conducted in observation group A and B，the correlation between antiphospholipid antibody level and pregnancy outcome was analyzed，and the correlation between different antiphospholipid antibodies was analyzed.Result：The total incidence of undesirable pregnancy outcome in observation group A was 46.67%，which was significantly higher than that in observation group B（36.66%）and control group（10.00%）.There was significant difference in adverse pregnancy outcomes in the three group（P<0.05）.The level of ACA-IgM in the two groups of group A and group B was（11.46±4.51）GPLU/mL，ACA-IgG was（9.42±3.51）MPLU/mL andβ2-GP1 was（104.63±21.83）U/Ml，there was a positive correlation between theβ2-GP1 antibody and perinatal mortality（P<0.05）;ACA-IgM，ACA-IgG and β2-GP1 antibody were positively correlated with preterm labor（P<0.05）;ACA-IgM and FGR were positively correlated（P<0.05）.There was a positive correlation between ACA-IgG，ACA-IgM andβ2-GP1 antibody in HDCP patients（P<0.05）.Conclusion：There is a certain correlation between ACA andβ2-GP1 antibody in HDCP patients and bad pregnancy outcome.The detection of APA level has a certain reference to the prediction of bad pregnancy outcome. 【Key words】 Gestational hypertension; Anticardiolipin antibody; Anti β2-GP1 antibody; Pregnancy outcome; Correlation
First-author’s address：Central Hospital of Longhua District，Shenzhen 518110，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.04.040
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1 资料与方法
1.1 一般资料 选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测孕妇ACA及抗β2-GP1抗体水平，根据ELISA法检测结果分组，观察组A为仅ACA阳性（ACA-IgM>7 MPLU/mL和/或以ACA-IgG>10 GPLU/mL）孕妇;观察组B仅抗β2-GP1抗体阳性（抗β2-GP1抗体>90 U/mL）孕妇;对照组为ACA及抗β2-GP1抗体均阴性孕妇，每组各纳入30例。纳入标准：符合《妇产科学》中关于妊娠期高血压疾病的诊断标准[5];支持并同意本项研究者。排除标准：既往有免疫疾病史;胎儿畸形;胎儿遗传性疾病。本研究已获得本院伦理委员会批准。
1.2 方法 分别抽取三组患者产前空腹状态静脉血3 mL，置于含10%（体积比）枸橼酸钠抗凝液的食管中，室温静置30 min后，采用离心机以3 000 r/min转速离心15 min，将上层分离血清置于-20 ℃冰箱中保存备用。检测步骤如下：（1）制备缓冲溶液和洗液，以体积比样本：缓冲液=1︰100稀释样品，制备样品标本;（2）准备好充足的微孔板条，每个微孔中加入缓冲液已稀释样本和100 μL质控品，室温培育30 min，将板条倒空，用洗液反复冲洗至少3遍;（3）微孔中加入100 μL酶结合物溶液，室温培育15 min，将板条倒空，用洗液反复冲洗至少3遍;（4）微孔中加入100 μL TMB底物溶液，室温培育15 min，再加入100 μL反应终止溶液，室温放置5 min;（5）使用酶联免疫吸附法（ELISA）分析仪读取450 nm波长处的吸光度值，仪器自动采用拟合曲线计算ACA-IgM、ACA-IgG 与抗β2-GP1抗体水平。
1.3 观察指标 观察三组患者的不良妊娠结局，包括围产儿死亡、早产、胎盘早剥、死胎、胎儿生长受限（fetal growth restriction，FGR）。
1.4 统计学处理 使用SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用率（%）表示，比较采用字2检验，采用Spearman等级相关分析研究参数间相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组患者基线资料比较 三组患者基线资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。见表1。
2.2 三组患者不良妊娠结局比较 观察组A不良妊娠结局总发生率为46.67%，明显高于观察组B36.66%和对照组10.00%，三组患者不良妊娠结局比较差异有统计学意义（字2=10.058，P=0.007）。
2.3 APA水平与妊娠结局的相关性分析 以观察组A和观察组B为对象进行研究，两组患者ACA-IgM平均为（11.46±4.51）GPLU/mL、ACA-IgG平均为（9.42±3.51）MPLU/mL、抗β2-GP1抗体平均为（104.63±21.83）U/mL。抗β2-GP1抗体与围产儿死亡呈正相关（P<0.05）;ACA-IgM、ACA-IgG和抗β2-GP1抗体均与早产呈正相关（P<0.05）;ACA-IgM与FGR呈正相关（P<0.05）。见表3。
2.4 不同抗磷脂抗体间相关性分析 150例HDCP患者的ACA-IgG、ACA-IgM和抗β2-GP1抗体均呈正相关（P<0.05），且ACA-IgG和ACA-IgM间呈正相关（P<0.05）。见表4。
3 讨论
HDCP是临床妊娠常见病，患者多于妊娠20周后，以表现出高血压等症状的形式发病，患者可伴随多脏器功能损伤，严重威胁着孕妇及胎儿生命安全。目前临床尚未探明HDCP病理学基础，但认为其会导致血管内皮细胞损伤，全身小血管痉挛，从而影响重要脏器官血液灌注量，引发不良妊娠结局[6]。国内外临床专家致力于HDCP发病机制的研究，也建立了各种发病机制学说，其中的胎盘缺血缺氧学说被广泛接受[7]。血管内皮细胞在胎盘缺血缺氧状态下损伤严重，全身小血管发生痉挛，最终衍生出HDCP临床症状。多项研究认为，ACA是一种自身抗体，其以心磷脂为靶抗原，多见于系统性红斑狼疮及其他自身免疫性疾病中[8-9]。伴随对ACA的深入研究，人们逐渐对ACA和HDCP的关系重视起来，ACA存在ACA-IgM、ACA-IgG和ACA-IgA三种亚型，ACA可降低血小板水量，对血管内皮细胞形成损害，形成胎盘微血栓，增加不良妊娠结局风险[10-12]。曾有报道，与正常产妇相比，HDCP患者ACA阳性率升高，ACA检测对于HDCP预测具有较高特异性和敏感性[13]。抗β2-GP1抗体是ACA和磷脂相结合的辅助因子，具有降低抗凝血酶活性，提高内皮细胞分子水平表达和促进高凝血液状态的作用[14-16]。为研究HDCP患者妊娠结局与APA的关系，本文选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇进行研究。 本研究分析APA水平与妊娠结局的相关性结果显示，仅ACA阳性和仅抗β2-GP1抗体阳性孕妇ACA-IgM平均为（11.46±4.51）GPLU/mL、ACA-IgG平均为（9.42±3.51）MPLU/mL、抗β2-GP1抗体平均为（104.63±21.83）U/mL。抗β2-GP1抗体与围产儿死亡呈正相关，ACA-IgM、ACA-IgG和抗β2-GP1抗体均与早产呈正相关，ACA-IgM与FGR呈正相关。提示，抗磷脂抗体水平对于不良妊娠结局具有一定影响，可为后续分子生物学研究提供基础[17-18]。
HDCP患者常见不良妊娠结局有围产儿死亡、早产、胎盘早剥、死胎、FGR等。本研究结果显示，仅ACA阳性孕妇不良妊娠结局总发生率为46.67%，仅抗β2-GP1抗体阳性孕妇不良妊娠结局总发生率为36.66%，均明显高于ACA及抗β2-GP1抗体均阴性孕妇（10.00%）。分析其中的原因，APA导致滋养细胞受损，人绒毛促性腺激素分泌量减少，不利于胚胎置入;APA导致血管内皮细胞受损，血小板聚集严重，纤溶与抗纤溶间建立的平衡被打破，血液处于高凝状态，形成血栓[19]。此外，分析不同抗磷脂抗体间相关性结果显示，ACA-IgG、ACA-IgM和抗β2-GP1抗体两两间均呈正相关，符合相关文献[20]报道结果。
总之，HDCP患者ACA及抗β2-GP1抗体与不良妊娠结局具有一定相关性，APA水平的检测，对预测不良妊娠结局具有一定参考。
参考文献
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（收稿日期：2018-07-19） （本文编辑：周亚杰）